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第十七章 流式細胞技術 Flow Cytometry 謝世良 國立陽明大學 免疫學研究中心 主任 一、前言 流式細胞儀（flow cytometer ）是現代生物學研究不可或缺的利器，除了可鑑定細胞的標 記外，還可分析細胞的分裂週期、DNA 含量、細胞凋零死亡（apoptosis ）、細胞內鈣離子的 濃度變化、pH 值之改變……等等。此外，流式細胞儀更可將細胞篩選出來，供進一步研究， 因此瞭解流式細胞儀的原理及用途，可為將來研究發展提供一個強而有力的利器。 二、流式細胞儀的演進 流式細胞技術（flow cytometry ）是指在流體狀態下觀測細胞的一種技術，而流式細胞儀 （flow cytometer ）則是指細胞於流體狀態下移動時，能夠觀測及記錄細胞特質的儀器。流式 細胞儀的發展，就像其它的科技發展般，是在科技演進的歷史過程中逐漸發展出來的。現代 流式細胞儀的產生主要是來自(a) 顯微鏡的技術發展，(b) 血球計數儀器（cell counting instrument ）的技術演進及 (c) 於 1960 年代為了發展電腦用印表機的噴墨技術（ink-jet technology ）等三方面為基石而發展出來的。 自17 世紀以來，顯微鏡已被廣泛用來觀察細胞及組織切片。到了 19 世紀末，細胞染色 技術也被陸續開發出來，使得細胞內部的各式各樣的結構在顯微鏡之下變得更清晰可見。 1940 及 1950 年代發明的螢光顯微鏡技術（fluorescence microscopy ），使人類可利用螢光 染劑（fluorescent dye ）來偵測DNA 以利癌症細胞的觀察。多株抗體（polyclonal antibody ） 的發展，使Albert Coons 得將螢光染劑與抗體結合，更大幅提昇螢光染劑的用途。照相機及 光偵測器（photodetector ）的發展，使我們得以記錄顯微鏡下螢光圖像。由Köhler 及Milstein （1984 年諾貝爾獎生理學得主）發展的單株抗體（monoclonal antibody ）技術，使得人類可 生產具有高度特異性（specificity ）及同質性 (homogeneity) 的單株抗體，這些抗體可分別 與不同的細胞成份結合（binding ），對後來的流式細胞技術的發展有極大的貢獻。 1934 年，位於Montreal 的Andrew Moldavan 是將靜態顯微鏡（static microscopy ）轉 換成流式系統（flowing system ）的先驅人員。他建議發展一種顯微儀器，使我們可觀察到通 249 過毛細管的白血球及被中性紅（neutral red ）染上顏色的酵母菌細胞，此儀器因加上了光偵 測器（photodetector ），所以可記錄通過顯微鏡下的細胞形狀及數目。雖然我們不清楚Andrew Moldavan 後來是否可真正地製造出此機器，但此種觀念卻是今日流式細胞儀的雛型。 1960 年代中期，Louis Kamentsky 依Moldavan 的觀念，發展出一種以顯微鏡為基礎的 分光光度計（microscope-based spectrophotometer ），使我們首次得以在每秒超過500 顆細 胞通過顯微鏡觀察點的速度下，仍能觀察到細胞吸收紫外線（ultraviolet absorption ）及藍色 的散色光（scatter of blue light ）的能力。1967 年Kamentsky 及Melamed 更進一步加以改 進，增加細胞篩選系統（sorting system ）。至1969 年，居住於德國 Münster 的 Dittrich 及 Göhde ，描繪出一種流式細胞儀，使我們可偵測到由酒精固定的DNA 與 ethidium bromide 結合所產生的螢光。 在這一段流式細胞技術進展的時期，Nallace Coulter 發展了所謂的 ”Coulter Technology” 以分析血球細胞。在1950 年代，Coulter 製造