RT-PCR及其RFLP研究技术对禽传染性支气管炎病毒的诊断与S1基因的鉴别的分析.pdfVIP

RT—PcR及RFLP分析技术对禽焦娑塞5 掣堕蔓的诊断和s1基因的鉴别研究+ y3055 78 摘要 本研究使用分别横跨整个S1糖蛋白基因(引物A)和Sl糖蛋白基 因N一端高变区I(引物B)的两对引物对3个IBV标准株’M41、 的片段，3个IBV地方分离株却扩增不到目的片段。用引物B时，8个 IBV毒株均得到与预计大小相符的目的产物(228bp)。对5个IBV的 1720bp的PCR产物用限制性内切酶HaeIII进行酶切，f结果得出三个不同 IⅡ酶切图 的RFLP图谱，其中M41、Connecticut、D41B具有相同的Hae I、Rsa 的PCR产物进行Dde I限制性内切酶消化，根据它们的RFLP图 谱，8个1BV毒株可分为五个基因型。)综合两对引物自@PCR产物RFLP分 析结果，8个IBV毒株可分为七个基因型。两种方法的分型结果与血 清学方法基本吻合。本研究建立的方法和技术具有快速、简单、特异、 灵敏等优点，为现场流行毒株的定型(基因型／血清型)及其Sl基因变 异的研究以及更有效防制传染性支气管炎奠定了基础。 II 。 IBV RFLP 关键：司 S1基。习。llT—PCR DIAGNOSISOFINFECTIOUSBRONCHITISVIRUS AND DIFFERENTIATl0N0FTIIES一1GLYCOPROTEINGENEBY USINGPOLYMERASECHAINREACTIONANDRESTRICTION FRAGMENTLENGTHPOLYMORPHISMANALYSIS ABSTRACT a Two of flank1720-base pairsprimers，one sequence S1 and thewholeglycoprotein A} containing gene(Primers anotherflankthe the one I(RVRI)in hypervariableregion were N-terminusofS1 (PrimersB) chosen 91ycoproteingene to 3referencestrains amplify and5 localisolates of were 8 strains