和茶树类黄酮合成相关的MYB转录因子的克隆及表达的研究.pdf

m㈣洲㈣洲川洲洲0mI 49894 Y21 摘要 具有重要的牛理牛化作用。涉及类黄酮牛物合成的基因有两类：编码相关合成酶的结 构基因和编码转录因子的调控基因。转录因子具有调控结构基因表达的功能。MYB 转录因子参与调控苯丙烷类次牛代谢途径，是植物中最大的转录因子家族之一。 为了明确MYB转录因r在茶树类黄酮物质合成中的作用，本研究克隆了茶树中 3个MYB转录因子，对其进行了牛物信息学分析；利用实时荧光定量技术，分析了 3个MYB基因的差异表达；构建了原核表达载体，表达了目的蛋白；构建了表达载 体，侵染拟南芥利烟草，进行3个MYB基因功能的初步分析。 丰要研究结果如下： 1．从NCBI、安徽农业大学茶树转录组中筛选得到些可能参与酚类物质合成 DM船彳一7基因全长。 CsMYB4—7蛋白均为不稳定蛋白和亲水性蛋白；一级结构分析显示3个基因都定位存 细胞核且都不存在信号肽；二级结构分析表明，3个蛋白均以a螺旋为丰，并通过 HTH) 的特征结构；三级结构分析表明，3个蛋白质的三级结构都很简单，由6个a一螺旋 条带简单的缠绕在无规则卷曲线上；分子系统进化分析表明CsMYB4—5与金鱼草中 致性为64．1 具有C1和EAR基序。 3．利用实时荧光定量PCR技术检测了三个基因在茶树不同器官、不同发育时期 叶片组织中的表达水平，结果显示，DM阳4—5和DM溜4．6两个基因均在根中高表 达，在茎中低表达；但是随着叶片伸展发育，两个基因的表达趋势并不完全相同。而 DM溜彳一7在根中低表达，在茎中高表达。另外，还检测了三个基因在植物激素GA GA和ABA和伤害处理产牛了2倍以卜-的表达差异，其余两个基因变化不大。 宿丰菌阳sef勉(DE3)，用IPTG诱导表达，得到目的蛋白条带。 5． 体和烟草。 Abstract accumulatesin Tea arememain metab01itesofnaVonoidmat p01yphen01s secondary and tea playimportantphysi0109ical plant([C白，玎P，，f以sf，2口咒s必(L．)O．K-untze])，and interrelatedandsome biochemicalr01es．Stmctural transcnptlon coding enzymes genes can factors innaVonoid regulate factorsareinvolved biosyntheticpathway．Tr狮s嘶ption structure factorison