大蒜素和金银花抗VSV诱导的细胞凋亡作用及机制的研究.pdfVIP

浙江大学医学院硕士研究生论文 大蒜素和金银花抗VSV诱导的细胞凋亡作用及其机制研究 浙江大学医学院 内科学(传染病) 2005级硕士研究生 常秀春 指导教师 吴南屏研究员 中文摘要 作用及其可能的分子机制。 物对THP．1，MT之和wISH细胞作用的毒性剂量，并据此分别选取三个不同的 安全浓度作为实验浓度。将细胞分为正常对照组，vsv对照组和药物预处理+ VSV作用组，然后选用三种不同浓度(50、25、lollg／ml的大蒜素；10mg／ml、 5 mg／ml金银花)的药物预处理三种细胞4h，再按MOI=10：1(10个 mg／ml和l 病毒感染1个细胞)的病毒量感染各组细胞诱导其凋亡，用倒置显微镜观察药物 和病毒作用后细胞的形态学变化，通过MTT法测定各组细胞的存活率，并用流 blot 式细胞仪通过AnnexinV／PI双染法检测各组细胞的凋亡百分比，用Western B的表达。 方法检测各组细胞中凋亡相关蛋白Caspase．3、6、7、9和NF．K 结果用倒置显微镜观察细胞形态，结果发现vsv对照组细胞出现了明显 的病毒感染的表现，而用药物处理组，细胞的状态出现了明显的好转；通过 MTT检测可以看出，不同浓度的大蒜素和金银花能够在不同程度上提高VSV 诱导的THP．1、MT-2和WISH细胞的存活率，且结果具有统计学意义；采用 Annexin V／PI双染法通过流式细胞计数仪检测各组细胞的凋亡率，从结果可以 凋亡百分比，其中尤以两种药物的高浓度组作用最为显著，呈现出明显的剂量 浙江大学医学院硕士研究生论文 blot方法检测各组细胞的凋亡相关蛋白的表达情况， 依赖关系：采用Western B蛋白的大量表达，大 结果表明，VSV可以激活Caspase-3、6、7、9和NF-K B的蛋白 蒜素和金银花可分别在不同程度上降低Caspase．3、6、7、9和NF—K 表达，且随着大蒜素和金银花浓度的升高，蛋白的表达量表现出逐渐减少的趋 势，其中以两种药物的高浓度作用组最为明显。 同程度的抑制作用，其机制可能与抑制细胞中凋亡相关蛋白Caspase．3、6、7、 9和NF-KB信号传导通路的激活有关。 NF．KB 2 浙江大学医学院硕士研究生论文 InhibitionEffectsofAllicinandFlos LoniceraeontheCells InducedVSVandthe Apoptosisby PossibleMolecular MechanismInvolved TheNational ofInfectious Diseases，FirstAffiliated of Keylaboratory Hospital，School medicme，ZhejiangUniversity 2005 XiuchunCHANG