第一节DNA重组技术的基本工具—上课版精品.pptVIP

限制性内切酶（EcoRⅠ）作用过程 DNA连接酶的作用过程 * 专题一 基因工程 第一节 DNA重组技术的基本工具 1、说明基因工程的基本含义。 2、概述基因工程的基本工具 本节聚焦 一、基因工程（DNA重组技术） 基因工程：指按照人们的愿望,进行严格的设计并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫作DNA重组技术或基因拼接技术。 ① 概念分析 优点 技术原理 操作环境 操作对象 操作水平 本质 结果 基因重组 生物体外 基因 分子水平 甲（供体）→乙（受体） 人类需要的基因产物 克服远源杂交不亲和 定向改造生物性状 ② 基本工具 限制性核酸内切酶（简称限制酶） DNA连接酶 运载体 1、基因工程的剪刀 指“ 限制性核酸内切酶 ” 主要是原核生物 识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 已发现的有4000多种，因而是一类酶 种类: 来源: 作用: “ ” 简称：限制酶 结果： 黏性末端和平末端 返回 切割DNA分子实质是断开两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 返回 中轴线 EcoRI SmaI 黏性末端 平末端 返回 拓展 ① 核酸酶 外切酶：从一端开始，将核苷酸一个个地水解 内切酶：从核酸中间水解 ② 限制来源：只切割外源DNA，不切割自身DNA；理由：对于某种原核生物而言，自身DNA有防御机制。 ③ 命名原则：Eco R I 大肠杆菌（Escherichia coli） 取属名的第一个字母和种名的前2个字母 。 作用： 把限制酶切下来的DNA片段拼接成新的DNA 实质是恢复被限制酶切开的磷酸二酯键 2、DNA连接酶 类型 来源 功能 相同点 差别 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复磷 酸二酯 键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和 平末端(效率较低) 作用的化学键：磷酸二酯键 返回 DNA连接酶 DNA聚合酶 相同点 作用实质 化学本质 不 同 点 模板 作用对象 作用结果 用途 都能催化形成磷酸二酯键 都是蛋白质 不需要 需要 形成完整的重组DNA分子 形成DNA的一条链 基因工程 DNA复制 只能将单个核苷酸连接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯键 在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 比较DNA聚合酶和DNA连接酶 A A T T G C A A T T A A T T DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶 DNA聚合酶的作用 返回 3、分子运输车—运载体 载体的作用 载体的必要条件 载体的种类 1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 2）具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 3）具有某些标记基因，便于进行鉴定和选择。 4）必须是安全的 ，对受体细胞无害。 5）载体DNA 分子应大小适中，以便于提取和操作 1）作为运载工具，将目的基因导入受体细胞中 2）在受体细胞内对目的基因进行大量复制 ①细菌的质粒 ②病毒：λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 独立于拟核之外 可自主复制 小型环状DNA分子.　 基本符合运载体的条件，但天然的质粒很少被利用，基本上是被人工改造之后的，例如PBR322 抗性基因（标记基因）：鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来 青霉素抗性基因 目的基因 导入受体细胞 大肠杆菌 存活；有抗性基因，有目的基因 放在含有青霉素的培养基中 死亡；无抗性基因，无目的基因 返回 返回 基因工程 的工具 限制 酶 主要存在于原核生物中 具有专一性(识别序列) 切开DNA分子的磷酸二酯键 DNA连 接酶 连接磷酸二酯键 种类 E.coliDNA连接酶 T4 DNA连接酶 运载 工 具 具备的 条件 能在宿主细胞中自 我复制并稳定存在 具一个多个限制酶切位点 具标记基因 质粒、 λ噬菌体衍生物 、动植物病毒 本节小结 1、下列有关基因工程中限制性内切酶的描述，错误的是（　　） A.一种限制酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列 B.限制酶的活性受温度影响 C.限制酶能识别和切割RNA D.限制酶可以从原核生物中提取 C 习题精讲 2、 以下有关基因工程的叙述，正确的是（ ） A、基因工程是细胞水平上的生物工程 B、基因工程的产物对人类都是有益的 C、基因工程产生的变异属于人工诱变 D、基因工程育种的优点之一是目的性强 D 如图为大肠杆菌及质粒载体的结构模式图，据图回答下列问题。 （1）a代表的物质和质粒的化学本质相同，都是______，二者还具有其他共同点