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多孔丝素蛋白膜材料的血管化进程研究 中文摘要 多孔丝素蛋白膜材料的血管化进程研究 中文摘要 多孔丝素蛋白膜(PSFFs)是具有良好的机械性能和理化性质，如柔韧性和抗拉 伸强度、降解性、有效的血管化能力等，所以在医学上广泛应用于人造血管、皮肤、 骨来代替、修补、辅助修复人体组织器官。利用多孔丝素蛋白膜辅助修复真皮时，必 然要求能够快速有效地血管化，而多孔丝素蛋白膜血管化过程是多孔丝素蛋白膜材 料、细胞因子、细胞和细胞外基质等因素相互协调作用和适应的过程。但是生物材料 中血管新生的细节及至材料与机体组织协同作用的的创伤环境条件下血管化的详细 过程相关的研究报告也比较少。 为了探讨多孔丝素蛋白膜材料应用于创伤修复中的血管化机制，需要对材料植入 体内时血管化相关的组织细胞与微环境在组织学和分子生物学水平上探讨与研究。本 研究以多孔丝素蛋白膜材料在创伤修复时血管化进程的动态观察作为研究研究目标。 通过对多孔丝素蛋白膜材料血管化过程的超微观察分析、血管化有关分子如HIF、 vB VEGF、整合素Q3和血管内皮细胞CD34等免疫组化分析，反转录聚合酶链式扩 增结合技术(RT—PCR)等手段对丝蛋白生物材料植入大鼠真皮层以后的血管化相关因 子HIF、VEGF及受体、Ang-1的行为趋势等进行观察与分析，以期探究材料与组织共 存情况下的血管新生过程的真实面貌，从而在分子水平和免疫组化水平对多孔丝素蛋 白膜材料血管化过程进行系统研究。 研究的内容主要分为以下三个部分： 第一部分为毛细血管形态学变化过程的实验跟踪研究及结果。这部分的工作采用 苏木素伊红(HE)染色从组织形态学上对血管形成过程和模式进行分析，并用透射电 镜的方法从超微结构分析内皮细胞形成的毛细血管成熟过程进行观察，并对血管新生 模式进行分析。结果说明了多孔多孔丝素蛋白膜材料内的血管化过程是血管网从无 到有，再从有经调整到优化、合理的血管网的过程以及内皮细胞从少到多，形成 新生毛细血管成熟的生长阶段。手术7天后多孔多孔丝素蛋白膜材料周围血管主 中文摘要 多孔丝素蛋白膜材料的血管化进程研究 要以出芽方式侵入材料，内皮细胞周围没有完整的基底膜；25天后主要是血管网 形成，以套叠方式优化血管，内皮细胞和周细胞连接紧密、基底膜完整。在利用 多孔丝素蛋白膜材料进行真皮创伤修复过程中，植入早期血管主要以出芽方式新 生，而随着修复过程的进行，血管新生方式中出芽方式逐渐减少，而套叠方式逐 渐增多，创伤修复后期毛细血管主要以套叠方式新生。 第二部分为毛细血管新生过程的免疫组化实验跟踪研究及结果。这部分的工作通 过制备创伤动物模型，以免疫组化的方法研究HIF、VEGF、血管内皮细胞标记物 CD34、整合素aVB 修复中表达的时相性变化，对他们定位、定性和定量研究，并对他们的变化趋势分 析，从而进一步探讨多孔丝素蛋白膜材料中的创伤修复和血管化的分子机制。按照统 计标准，结果表明手术1天时，多孔丝素蛋白膜和PVA材料里的内皮细胞CD34表达 阴性，材料里充满成纤维细胞和炎症细胞；手术7天，15天，25天时PSFFs中微血 B 管出芽的标记物整合素av3、细胞外基质的主要成分FN和基底膜LN的变化趋势。 得出PSFFs的血管化过程遵循创伤修复血管形成的一般特点，但也体现了自己的优越 性，加快了修复过程。PSFFs比PVA具有良好的血管化能力，并且有利于细胞入侵、 血管新生、细胞外基质的重建，从而使组织修复达到良好的效果。另外此结果对血管 在多孔丝素蛋白材料中的生长模型进行了完善。 第三部分为以分子生物学的方法对毛细血管新生过程相关分子，生长因子进行实 验跟踪研究及结果。这部分的工作通过逆转录一聚合酶链式反应(RT—PCR)方法对VEGF 及受体、Ang一1、整合素、tIIF进行扩增，观察他们在4个时间段的变化趋势。结果 成相关分子为适应环境发生了相关的改变。 多孔丝素蛋白膜材料的血管化进程研究 中文摘要 通过以上三部分内容的研究，对多孔丝素蛋白膜材料植入实验中的血管形成过程 进行了系统观察分析与研究，通过与对照材料PVA实验结果比较，确认了丝素