第五章噬菌体载体精品.pptVIP

第五章 噬菌体载体和柯斯载体 第一节 噬菌体的一般生物学特性 第二节 λ噬菌体载体 第三节 柯斯质粒载体 第四节 单链DNA噬菌体载体 第五节 噬菌粒载体 —————————— 克隆外源DNA的能力： * 质粒：15 kb左右； * λ噬菌体：25 kb左右； * 柯斯载体：45 kb左右。 基因工程又称重组DNA技术 其实施至少要有四个必要的条件 1. 工具酶 2. 基因 3. 载体 4. 受体细胞 （《基因工程..》静国忠，85页） 噬菌体定义： 是一类细菌病毒的总称。 噬菌体与质粒的区别 * 质粒：仅是一种含有复制起点的裸露的DNA分子。 * 噬菌体：DNA分子除了复制起点之外，还有编码外壳蛋白质的基因。 第一节 噬菌体的一般生物学特性 噬菌体依赖寄主细胞进行生长与增殖。 1. 噬菌体的结构及其核酸类型： * 一般分为三种类型： 无尾部结构的二十面体型。 具尾部结构的二十面体型。 线状体型。 * 大多数噬菌体都属于第二种类型。 1. 噬菌体的结构及其核酸类型： 噬菌体的核酸： 最常见的是：双链线性DNA。 还有双链环形DNA、 单链环形DNA、 单链线形DNA、 单链RNA。 有些噬菌体DNA碱基不是由标准的A、T、C、G四种碱基组成。 如T4噬菌体DNA中没有C，取代的是5-羟甲基胞嘧啶（HMC）。 1. 噬菌体的结构及其核酸类型： 常用作基因工程的噬菌体： ◆双链噬菌体：λ噬菌体。 * 野生型λ噬菌体经过改造，已衍生出100多种克隆载体。 *目前常用的有： EMBL系列、 λgt系列、 Charon系列。 ◆单链噬菌体：M13噬菌体。 2. 噬菌体的感染性 一个噬菌体颗粒 → 感染一个细菌细胞 → 迅速形成数百个子代噬菌体颗粒 → 每一个子代颗粒又各能够感染一个新的细菌细胞 → 再产生出数百个子代颗粒。 如此只要重复四次感染周期，一个噬菌体颗粒便能够使数十亿个的细菌细胞致死。 噬菌斑：感染的细菌细胞被噬菌体裂解之后留下的空斑。 菌苔（lawn）：覆盖培养基表面的单层细菌。 (英含遗工词) 2. 噬菌体的感染性 将少量的噬菌体颗粒加入到高浓度的细菌培养物中，并在新形成的子代噬菌体导致寄主细胞发生第一次裂解之前，将此培养物涂布在琼脂平板上，20-30分钟之内，头一批感染的细菌细胞便会发生裂解，释放出子代噬菌体颗粒。 由于在琼脂平板上长有许多细菌，所以释放出来的噬菌体，便可迅速地吸附到邻近的细菌细胞上，重复发生感染周期。 此种细菌的裂解反应是以最初被感染的细胞所在的位置为中心，慢慢地向四周扩展，最后在琼脂平板上形成大量的噬菌斑。 2. 噬菌体的感染性 噬菌体对寄主细胞的感染作用： 烈性噬菌体的生命周期： 噬菌体同敏感细胞接触，尾部粘到细胞壁上 ↓ DNA注入到被感染的细菌细胞 ↓ 噬菌体DNA复制 ↓ 合成出新的头部及尾部蛋白质 ↓ 组装成子代噬菌体颗粒 ↓ 寄主细胞壁被破坏并发生溶菌 ↓ 释放出子代噬菌体颗粒 噬菌体：细菌病毒。 烈性噬菌体：感染寄主细胞后能进行复制、增殖，最后引起细胞裂解的噬菌体。只有溶菌生长周期的噬菌体。 温和性噬菌体（溶原性噬菌体）：感染细菌后能使细菌产生溶原性的噬菌体。既能进入溶菌生命周期又能进入溶原生命周期的噬菌体。 溶原性：温和噬菌体感染细胞形成原噬菌体的过程。 原噬菌体：在溶原性细菌内存在的整合的或非整合的噬菌体DNA。 溶原性细菌：细胞中含有以原噬菌体状态存在着的温和噬菌体的细菌。 噬菌斑：在含细菌的固体培养基上，噬菌体使细菌细胞裂解而形成的空斑。 3. 噬菌体的溶菌生命周期 噬菌体的生命周期分为： 溶菌周期。 溶源周期。 两种类型的噬菌体： 烈性噬菌体：只有溶菌周期。 温和噬菌体：具有溶源周期的噬菌体。 3. 噬菌体的溶菌生命周期 基本过程为： （1）吸附：噬菌体颗粒吸附到细胞表面的特殊接受器上。 （2）注入：噬菌体DNA穿过细胞壁注入寄主细胞。 （3）转变：被感染的细菌成为制造噬菌体颗粒的场所。 （4）合成：功能发生了转变的寄主细胞合成噬菌体的核酸和蛋白质。 （5）组装：包装了DNA的头部和尾部组装成噬菌体颗粒。 （6）释放：新合成的子代噬菌体颗粒从寄主细胞内释放出来。 4. 噬菌