分子伴侣hsp04对prp106-126肽聚集形成纤维影响的初步研究.pdfVIP

摘 要 摘 要 目的 (1)研究Hspl04是不是可以阻止异常朊蛋白的聚集或者对异常朊蛋 白的聚集具有解聚作用，为研究PrP聚集体或单体对神经细胞是具有保护作用 还是毒性作用具有一定的意义；(2)根据PrPl06—126肽具有聚集成纤维的特点， PrP聚集形成的机制。 缓冲液溶解，然后把样品分成两组，一组加Hspl04蛋白59M，另一组未加Hspl04 采用荧光光谱法(ThT分析法)、透射电子显微镜、原子力显微镜、圆二色谱法 和MTT比色法对样品进行检测。 结果 利用原核表达系统成功表达了全长Hspl04蛋白；在体外实验过程中 证实PrPl06．126可以形成纤维，而且随着孵育时间的延长，纤维越来越细，相 细胞的毒性要低。当Hspl04存在时PrPl06—126肽可以保持其对细胞的毒性。 并且能够明显的抑制PrPl06．126纤维的形成，同时其解聚作用也很明显。其作 用机制是通过改变PrPl06．126肽的二级结构从p．折叠结构转变成无规卷曲，而 使已经聚集形成的纤维发生解聚，从而可以拮抗PrPl06．126肽纤维聚集的形成 来阻止淀粉样转变。从而保持PrPl06一126肽对细胞的毒性。 结论 利用原核表达系统成功表达全长热休克蛋白Hspl04蛋白；从动力 学、形态学、二级结构三方面证实热休克蛋白Hspl04在体外可抑制PrPl06—126 肽聚集形成纤维；体外细胞毒性实验证实热休克蛋白Hspl04能够抑制 力学实验证实热休克蛋白Hspl04对PrPl06．126肽形成的纤维具有解聚作用； 体外细胞毒性实验证实热休克蛋白Hspl04能够使PrPl06．126肽聚集形成的纤 维解聚成PrPl06．126肽或低聚物，诱导细胞毒性作用。 图4表8参28 104；PrPl06-126肽；淀粉样蛋白 关键词：异常朊蛋白；Hsp 分类号：(1—2)R318．0： 摘 要 Abstract of behaviorfromother be Objectives：(1)Observationsprion—like systemsmay forhow aswellas 104 informative is yeast．Thus，callHspprevent priorifunctioning PrP106—1267Itwill whether orreverse or of helpclarify amyloidosesaggregation is ortoxicin PrP106—126 disease．(2)Weemploy PrP乳aggregationprotective prion which fibrilsandneurotoxictodelineate hascharacteristicof amyloidlike activity howl04modulatesPrP106—126 and fibrils． Hsp aggregationamyloidlike this was Methods：(1)In full-len