北部湾pahs解菌的分离、鉴定及菌种间协同降解效应研究.pdfVIP

摘要 北部湾PAHs 降解菌的分离、鉴定及菌种间协同降解效应研究 摘 要 多环芳烃（Polycyclic Aromatic Hydrocarbons, 简称PAHs ）是一类由两个或 两个以上苯环组成的稠环化合物，是海洋环境中广泛存在的持久性有机污染物 （Persistent Organic Pollutants ，POPs ），具有潜在的致癌、致畸、致突变效应， 对海洋生态环境和人类健康造成极大危害。研究表明，微生物降解是海洋环境中 去除PAHs 的主要途径之一，因此，从海洋环境中获取并研究PAHs 降解菌具有 重要意义。 该论文研究内容主要包括两个方面。 第一部分，北部湾沉积物中PAHs 降解菌的分离、鉴定及生物多样性分析： 利用菲和PAHs 混合物（菲、芘）两种碳源从北部湾沉积物中富集获得4 个不同 的PAHs 降解菌群，以挥发性萘为唯一碳源和能源，采用平板培养法获得PAHs 降解菌纯培养，并采用基于16S rRNA 基因的系统发育学分析对其进行初步分类 学研究。分离、鉴定35 株可培养的PAHs 降解菌，它们分别隶属于Marinobacter 、 Halomonas 、Planococcus 、Vibrio、Bacillus 5 个属。其中Marinobacter 细菌 23 株，3 种，而 Marinobacter hydrocarbonoclasticus 占细菌鉴定总数的 54% ； Halomonas 细菌10 株，1 种；Planococcus 细菌1 株，1 种；Vibrio 细菌1 株，1 种；Bacillus 细菌1 株，1 种。 第二部分，3 株专性解烃菌解环菌属细菌(Cycloclasticus spp.)的降解特性及 其协同降解效应研究：从黄海沉积物中分离获得了 3 株解环菌属细菌， Cycloclasticus sp. NY93E、Cycloclasticus sp. PY97M 和Cycloclasticus sp. PY97N 。 采用唯一碳源和能源培养法确定了3 株解环菌的碳源利用范围，探明了其代谢特 性。C. sp. PY97M 与协同菌株Marinobacter nanhaiticus D15-8WT 构建共培养体系 协同降解 HMW-PAHs( 以芘、荧蒽为模式化合物) ，通过气相色谱-质谱联用 （GC-MS ）技术测定共培养体系对芘和荧蒽的降解率；同时，通过发光细菌法 I 北部湾PAHs 降解菌的分离、鉴定及菌种间协同降解效应研究 对HMW-PAHs 降解后的代谢产物的生物毒性进行检测，通过以上指标的测定， 对构建降解菌群的HMW-PAHs 降解效果进行综合评价。结果表明，3 株解环菌 具有较广的碳源利用谱，包括简单碳源、PAHs 降解中间产物、单环芳烃及多环 芳烃；由Cycloclasticus sp. PY97M 和Marinobacter nanhaiticus D15-8WT 组成的 菌群（PY97M+D15-8W ）对初始浓度均为0.1 g/L 的单一碳源芘、荧蒽21 d 后的 降解率分别为 67.40%和 62.79%，相对于纯培养 PYP7M 分别提高了 20.30%和 20.29% 。另外，该菌群对初始浓度均为0.1 g/L 的芘和荧蒽组成的混合碳源14 d 后的降解率分别为 71.05%和 67.36%；生物毒性检测结果显示，HMW-PAHs 经 该菌群降解后其急性毒性和遗传毒性相对于母体都有显著降低。解环菌与海杆菌 在芘和荧蒽的降解过程中表现出明显的协同效应，表明该菌群具有应用到 HMW-PAHs 污染海洋环境生物修复的潜力。 综上所述，本论文通过对北部湾沉积物中PAHs 降解菌的多样性分析，获得 多株高效降解PAHs 的海洋细菌，为该海域微生物资源的遗传多样性和物种多样 性研究提供了有价值的参考；通过对三株解环菌碳源利用范围的研究，探明了3 株解环菌属细菌的HMW-PAHs 降解特性及代谢特性，并探讨了在解环菌及协同 菌株的构建共培养体系中HMW-PAHs 的协同降解机制。 关键词：高分子量多环芳烃；PAHs 降解菌协同效应；解环菌；海杆菌；协