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2010年版药典附录无菌检查和微生物限度检查方法存在问题及修定内容 国家药典委员会 杜平华 起草的指导思想 着力解决发展中的问题,提高我国药品标准总体水平，着力提升《中国药典》在国际社会中的地位和作用，提高综合竞争力， 2010年版无菌检查法 一、进一步确定了无菌检查法的定义： 无菌检查法系用于检查要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。 二、进一步明确了无菌检查保障 1、检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染 ，但采用的措施不得影响微生物的生长。 2 、无菌检查环境检测日常检验还需进行环境检测。 3、无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。 三、培养基 ⒈删去硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基的使用范围。 ⒉删去选择性培养基使用的表面活性剂种类 3、培养基灵敏度试验 ⑴ 菌悬液制备中黑曲霉菌悬液的制备 “用适宜的方法吸出孢子悬液”。  ⑵在稀释液0.9%无菌氯化钠溶液中加入0.05％v/v）聚山梨酯80。 四、试验稀释液、冲洗液 ⒈ 增加根据供试品的特性，可选用其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液。 ⒉试验中使用的中和剂、灭活剂和表面活性剂除证明其有效性外还应证明对污染的微生物无影响修改为无毒性。 五、方法验证试验 ⒈试验菌株 大肠埃希菌替代铜绿假单胞菌 ⒉供试品用量 薄膜过滤法 取每种培养基规定接种的供试品总量。 六、供试品的无菌检查法 ⒈检验量 直接接种法除另有规定外，每份培养基接种的供试品量按表2、表3规定。 ⒉薄膜过滤法 　⑴滤膜选择 抗生素供试品滤膜应选择低吸附的滤器及滤膜。 ⑵冲洗量 每张滤膜每次冲洗量一般为100ml，总冲洗量不得超过1000ml 。 ①水溶液供试品 含抑菌成分所用的冲洗量、冲洗方法同方法验证试验。 ⑵装有药物的注射器供试品 　 取规定量，排出注射器中的内容物至无菌容器中，若需要可吸入稀释液或标签所示的溶剂溶解，或非水溶性制剂供试品项下方法操作。 ⑶无菌气雾剂 供试液的制备将供试品置至少-20℃的冷冻室约1小时。 ⒋　直接接种法删除β－内酰胺类或磺氨类供试品。 表1 、表2 、表3增修订 表1 （第3列）接种每种培养基改为所需的最少检验数量 表2 （表题）上市抽验样品（液体制剂）的最少检验数量修改为液体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验数量 　第二列每支样品接入每管培养基的最少样品量修改为每支供试品接入每管培养基的最少样品量 　　第三列最少检验数量（瓶或支）≤1 全量 ２0 ① 修改为供试品最少检验数量（瓶或支） １0 ① 注① 每种培养基各接种１０支供试品修改为若供试品每个容器内的装量不够接种两种培养基，那么表中的最少检验数量加倍。 　表3 （表题）将上市抽验样品（固体制剂）的最少检验量 　修改为固体制剂最少检验量及上市抽验样品的最少检验数量” 第三列最少检验数量、≤1 全量 ２0 ① 修改为供试品最少检验数量（瓶或支） １0 ① 　注① 每种培养基接种１０支培养基修改为若供试品每个容器内的装量不够接种两种培养基，那么表中的最少检验数量加倍。 微生物限度检查 1、培养条件 控制菌培养温度30℃～35℃。 2、结果报告 特殊品种可以最小包装单位报告 特殊品种包括∶ ⑴药典规定微量包装药品的检验量可以酌减。 ⑵一些贵重药品也应考虑检验量。 3、检验量 ⑴中药膜剂检验量100cm2 。 ⑵沙门菌检验量为20 g或20ml（其中10 g用于阳性对照）。 4、供试液的制备 ⑴供试品检查时使用表面活性剂应证明其对 微生物生长和存活无毒性。 　⑵供试液的制备若需加温时，可采用其他经 验证的方法，但应均匀加热，且温度不应超 过45℃。 ⑶新增贴剂供试液制备 供试液的制备 ⑴经验证方法制备成供试液在无菌环境进行。 ⑵避免粘贴面粘合在一起。 ⑶置于含有表面活性剂（如聚山梨酯80或卵 磷脂）的稀释剂中，制成供试液。 ⑷充分振摇。 ⑸也可采用以其他适宜的方法制备成供试液。 ⑷具抑菌活性的供试品 当供试品具有抑菌活性时，应尽量选择操作简便、快速的方法，应避免损伤供试品中污染的微生物。在供试品溶液性状允许的情况下，应尽量选用薄膜过滤法。 ①离心沉淀集菌法 500转/分离心，不超过3分钟，取全部上清液用于检查。 影响因素 供试品 污染菌特性 适用范围 ⒈仅使用于微生物限度检查供试液的制备。 ⒉尽量避免使用，不可使用快速离心。 细菌、霉菌及酵母菌计数 ⒈　计数培养基的适用性检查 　　⑴菌种 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 黑曲霉 ① 菌悬液的制备及保存条件。 菌悬液制备后在室温下放置应在2小时内使用，若保存在2～8℃可以在24