韩丽晶—微生物的实验室培养精品.pptVIP

一、微生物的利用 1．进行微生物的分离与培养 技能性独立操作水平（ⅡA） 实验：大肠杆菌的实验室培养（可行） 锁定：（1）培养基的配比与制作 （2）无菌技术 （3）接种之平板划线操作 （4）菌落观察 专题重点：①无菌技术的操作。②对土样的选取和选择培养基的配制。③从土壤中分离分解纤维素的微生物。专题难点：①无菌技术的操作。②对分解尿素的细菌的计数。③从土壤中分离分解纤维素的微生物。 ☆ 选择培养基 固体培养基和培养皿的来历 分离培养微生物，离不开固体培养基。在微生物实验室里，固体培养基的使用是如此地频繁和常规，以至于这一方法看起来也理所当然。然而，回溯至1881年固体培养基出现以前，微生物的培养还只能在液体培养基中进行。为了能直接观察培养物的形态及生长情况，科学家希望能将微生物培养在固体表面上，就像微生物生长在橘子皮或土豆上一样。德国医生罗伯特·科赫（Robert·Koch，1843—1910）曾用煮沸消毒的土豆来培养细菌。此后，他试着用明胶作培养基的凝固剂。他将明胶加入液体培养基中进行融化，然后将混合均匀的液体缓慢地倒在一块玻璃板的表面。当明胶冷却凝固后，就在玻璃板表面形成一层固体培养基。为了防止空气中杂菌的污染，科赫还用玻璃罩将玻璃板与周围环境隔离开来。但是，人们很快发现，明胶在20 ℃以上就变软了，很难进行分离微生物的划线操作。在温度高于25 ℃时，明胶就液化了，而大多数细菌的培养温度都不低于25 ℃。科赫的同事Walter Hesse也为同样的问题苦恼着。一次，Hesse的妻子Fannie建议丈夫试一试用琼脂做凝固剂，因为Fannie用琼脂做果冻做得不错。Hesse采纳了妻子的建议，发现琼脂比明胶更适合做培养基的凝固剂。这个改进的方法很快就被大家采纳。 1887年，Richard Petri发表了一篇短文，对Koch平板技术作了又一次的改进。Petri设计了一种圆形并带有围边的双盘，一个大，一个小。制作固体培养基时，将融化的培养基倒入小盘内，然后再用大盘盖在小盘上就可以了。这就是我们今天所使用的培养皿。 回顾历史，我们可以看出，Koch的固体培养基的方法以及他对微生物学中纯培养技术的重视，远远超过了其所在的医学细菌学领域。他的发现为细菌分类学、遗传学和其他相关学科的发展提供了极为重要的工具。 菌落： 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 菌落是鉴定菌种的重要依据。 二. 无菌技术 思考： 1. 什么是无菌技术？包括哪些方面？ 2. 无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？（P15旁栏思考） 3. 消毒和灭菌有何不同？ 4. 常用的消毒和灭菌方法有哪些？ ☆ 选择培养基 巴氏消毒法主要原理 　　在一定温度范围内，温度越低，细菌繁殖越慢；温度越高，繁殖越快。但温度太高，细菌就会死亡。不同的细菌有不同的最适生长温度和耐热、耐冷能力。巴氏消毒其实就是利用病原体不是很耐热的特点，用适当的温度和保温时间处理，将其全部杀灭。但经巴氏消毒后，仍保留了小部分无害或有益、较耐热的细菌或细菌芽孢，因此巴氏消毒牛奶要在4℃左右的温度下保存，且只能保存3~10天，最多16天。 目前国际上通用的巴氏高温消毒法主要有两种： 　　一种是将牛奶加热到62~65℃，保持30分钟。采用这一方法，可杀死牛奶中各种生长型致病菌，灭菌效率可达97.3%~99.9%，经消毒后残留的只是部分嗜热菌及耐热性菌以及芽孢等，但这些细菌多数是乳酸菌，乳酸菌不但对人无害反而有益健康。 　　第二种方法将牛奶加热到75~90℃，保温15~16秒，其杀菌时间更短，工作效率更高。但杀菌的基本原则是，能将病原菌杀死即可，温度太高反而会有较多的营养损失。 加入青霉素的培养基： 分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基： 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基： 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基： 分离自养型微生物 加入青霉素等抗生素的培养基： 分离导入的目的基因的受体细胞 加入氨基嘌呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基： 分离杂交瘤细胞 接种环 接种针 涂布器 二 实验操作 （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 称量 溶化 灭菌 倒平板 ①溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一 起加热? 可保证粘附在称量纸上的牛肉膏也能溶于 水中，减少误差。 计算 二 实验操作 （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 称量 溶化 灭菌 倒平板 ②加琼脂的目的是什么? 作为凝固剂 计算 二 实验操作 （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 称量 溶化 灭菌 倒平板 ③在灭菌前, 用牛皮纸、旧报纸包紧盛有 培养基的锥形瓶的目的是什么？ 在灭菌时能避免水蒸汽凝结时浸湿棉塞， 在取出培养基锥形