高中生物选修三DNA重组的基本工具精品.pptVIP

专题一 基因工程 基因工程的基本内容 定向基因改造设想 基因工程概念 基因工程：按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计与施工的，因此又叫做DNA重组技术。 例：基因工程培育抗虫棉的简要过程 第一章第1节DNA重组技术的基本工具 1. 载体具备的条件 能自我复制，能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达； 有一个至多个限制酶切割位点 有遗传标记基因 对受体细胞无害、容易分离 3、载体的人工改造 思考 讨论 小结 1.在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（ ） 同种限制酶 B. 两种限制酶 同种连接酶 D. 两种连接酶 * * 基因是什么？基因的复制表达 基因工程的概念 基因操作的工具 基因操作的基本步骤 应用 蛋白质工程 设想一 能否让禾本科的植物也能够固定空气中的氮？ 能否让细菌“吐出”蚕丝？ 设想二 能否让微生物产生出人的胰岛素、干扰素等珍贵的药物？ 设想三 经过多年的努力，科学家于20世纪70年代创立了可以定向改造生物的新技术——基因工程。 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 与运载体DNA拼接 棉花植株 导入 需要解决的问题： 1、如何从苏云金芽孢杆菌中辨别出所需抗虫基因并把它切割下来； 2、如何将切割下来的抗虫基因与棉花的DNA“缝合”起来。 培育抗虫棉需要哪些工具？ 分子手术刀—限制性内切酶 分子缝合针—DNA连接酶 分子运输车—运载体 识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。 约4000种。 1、来源： 2、种类： 3、作用： 4、结果： 形成两种末端 一、 “分子手术刀” ——限制性核酸内切酶 黏性末端 平末端 限制性核酸内切酶的作用： 回文结构：沿中轴线反向重复 作用特点：专一性 什么叫黏性末端？ 当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA两条链分别切开时，产生的是黏性末端 什么叫平末端？ 当限制酶在它识别序列的中心轴线处切开时，产生的是平末端 二、ＤＮＡ连接酶——“分子缝合针” １.DNA连接酶的作用：连接两条DNA链，形成磷酸二酯键 E.coliDNA连接酶：连接黏性末端 T4DNA连接酶：连接黏性末端和平末端 ２.DNA连接酶的种类 限制酶切割后产生两种不同的末端。那么恢复它们的连接时，所用DNA连接酶是否可以不加选择？ DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同点和不同点？ 想一想 连接部位 DNA连接酶 DNA聚合酶 连接DNA链 相同点 双链 单链 在两DNA链之间形 成磷酸二酯键， 不需要模板 将单个游离的核苷酸加到已存在的核酸片段的3’末端的羟基上，形成磷酸二酯键。 需要模板 都能形成磷酸二酯键 二者都由蛋白质构成 三、基因进入受体细胞的载体 ———“分子运输车” 必要条件：能够在受体细胞中稳定地保存下来并大量复制，提供大量的目的基因 能自我复制，并且可以带着插入的目的基因一起复制 有切割位点 有标记基因的存在，可用含青霉素的培养基鉴别。 载体举例：质粒（抗虫棉培育） 2、常用的载体种类 质粒、λ噬菌体衍生物、动植物病毒 1、限制酶存在于原核生物中的作用是什么？ 2、DNA连接酶与DNA聚合酶有什么区别？ 3、具备什么条件才能充当“分子运输车”？ 切割外源DNA，使之失效，从而达到保护自身的目的。 DNA聚合酶只是将单个游离的脱氧核苷酸加到已有核酸片段的3‘端； DNA连接酶连接两条DNA链。 DNA聚合酶需要一条DNA链为模板 能自我复制、有一个或多个切割位点、有标记基因位点及对受体细胞无害等 1、为什么限制酶不剪切细菌自身的DNA? 2、天然的DNA分子能直接用作基因工程载体么？ 其DNA分子中或者不具备这种限制酶的切割序列，或者将自身的相应序列通过甲基化酶甲基化，使限制酶不能切割自身的DNA 一般是需要人工改造后才能用于基因工程操作。 基因工程 的工具 限制酶 主要存在于原核生物中 具有专一性(识别序列) 切开DNA分子的磷酸二酯键 DNA连 接酶 连接两条DNA链，形成磷酸二酯键， 种类 E.coliDNA连接酶 T4 DNA连接酶 运载 工具 具备的 条件 结构简单,大小适中 能在宿主细胞中稳定存在并自 我复制 具一个多个限制酶切位点 具标记基因 种类：质粒、λ噬菌体衍生物 、动植物 病毒 A 练习