植物病毒沉默抑制子P25的原核表达及多克隆抗体制备.pdfVIP

摘 要 virus 马铃薯x病毒(potatox，Pvx)的P25蛋白是参与病毒在细胞和细胞之间运动 的一个重要蛋白，它在转录后水平的基因沉默中起到抑制作用，能够提高PVx病毒侵 染植物的成功率。本研究对植物病毒沉默抑制子P25进行原核表达、纯化并制各该抑制 子的多克隆抗体，为下一步研究抑制子在基因沉默中的分子机理奠定基础。通过体外 DNA连接酶的 DNA重组技术，将来源于pBIN61-p25质粒上的目的基因p25片段在T4 I和勋c I酶切位点之间，构建重组 作用下，插入到原核表达载体pET-28a(+)的B鲫H 转化到大肠杆菌BL2l(DE3)，加入终浓度为1．OmM的异丙基-且一D一硫代半乳糖苷 kDa 的P25融合蛋白。该P25融合蛋白以可溶形式存在，扩大培养按1：40的比例浓缩后在 白