金樱子总黄酮的制备及生物活性研究.pdf

金樱子总黄酮的制备及其生物活性研究 硕士研究生：刘月涛 指导教师：彭金咏 教授 专业名称：微生物与生化药学 摘 要 目的：制备金樱子总黄酮(TFs)并考察其生物活性。 方法：本研究主要从以下方面进行：(1)TFs的制备及质量。以总黄 酮的含量为测定对象，利用正交试验法优选总黄酮的提取工艺条件：通 和对水解产物黄酮苷元的测定来建立质量标准。(2)总黄酮体内外抗氧化 原力的测定，并考察了其对红细胞溶血和脂质过氧化的抑制作用，以维 C1作为阳性对照。此外，通过给药后小鼠血清、肝和肾组织 生素C(Vit 水平的变化来评估它的体内抗氧化能力。(3)总黄酮对小鼠高脂血症的保 护作用及其机制研究。正常小鼠分别给予高脂饮食和不同给药剂量总黄 酮(25，50mg／kg，i．g．)，并以非诺贝特为阳性对照。实验结束后，通过测 的水平评价其降脂活性。通过组织病理学、ALT(谷丙转氨酶)、AST(谷 草转氨酶)和ALP(碱性磷酸酶)等指标的测定探讨总黄酮对高脂饮食 所致的脂肪肝的保护作用。此外还考察了其对实验动物中体内抗氧化系 统的影响。(4)总黄酮对高脂血症大鼠的治疗作用及其血液流变学影响。 造模后的高脂大鼠给予总黄酮(100 mg／kg)和阳性对照药非诺贝特4周。实 验结束后测定血清的TC、TG和HDL．C水平评价其降脂活性。并通过测定 血液流变学的变化来验证其降脂活性。(5)总黄酮对扑热息痛诱导的急性 小鼠肝损伤的保护作用及其机制研究。在这项研究中，小鼠分别被灌胃 不同剂量的总黄酮(50和200 00 mg／kg)和联苯双酯(1mg／kg)5天，在最后 一次给药2h后，除空白组所有实验动物腹腔注射扑热息痛(400mg／k91。 等指标来考察TFs对肝损伤的保护作用和体内抗氧化系统的影响。并通过 Western 表达水平。(6)通过急性毒性试验来初步考察金樱子总黄酮的毒性。 结果：正交试验法优化的金樱子最佳提取条件是用8倍量的60％乙醇 0 回流提取2h，共2次；Dl1树脂制备工艺是用4倍树脂柱床体积的水除杂 和6倍树脂柱床体积的40％乙醇洗脱得到纯度为78．45％的TFs。产物经水 解后经HPLC分析显示槲皮素、山柰素、异鼠李素的总含量为7．37％。体 内外抗氧化活性实验显示TFs对DPPH、·OH和·O。2有较强的清除作用，其 IC50值分别为0．01、0．04和0．08 C。TFs mg／mL，还原力稍弱于阳性对照Vit 在浓度为0．35 mg／mL和2．00mg／mL时，还分别具有71．62％和48．45％的红 细胞溶血和脂质过氧化的抑制作用。在体内抗氧化方面，TFs(100mg／kg) 能明显提高血清和肝和肾组织中T-AOC和SOD的水平，并显著降低MDA； TFs在50 5％和25．68％。此外，TFs 中，ALT、AST和ALP分别升高了55．85％、29．1 胱甘肽过氧化酶)水平；TFs对高脂大鼠的治疗作用及其血液流变学研究 显示金樱子总黄酮在给药100mg／kg时对高脂大鼠的血清TC和TG分别极 显著地降低了60．80％和62．39％(p0．01)，略强于非诺贝特(40mg／kg，分 (pO．05)，而纤维蛋白含量无明显变化。与模型组相比，在对扑热息痛诱 导的小鼠急性肝损伤的保护作用中，高剂量给药组小鼠血清的ALT、AST Bax、p53和NF．rBp65的蛋白表达，同时下调TNF．a的表达。在急性毒性 实验中，我们发现金樱子总黄酮在给药剂量为20g／kg时未见任何动物死 亡。 结论：本实验中从中药金樱子中制备得到的总黄酮，具有制备工 艺简单、含量高、质量可控等优点，适合于工业化生产。进一步的 药效活性显示制备得到的总黄酮具有显著的体内外抗氧化活性、对高 脂血症及心脑血管疾病有着很好的