喹烯酮残留标示物的ELISA检测方法研究及半抗原设计与合成.pdf

摘 要 我国自主研制的喹噫啉类新兽药喹烯酮，具有毒性小、活性高的优点，属高效、安全的饲料 添加剂，但因作为兽药使用，仍需考虑其通过食物链作用对人体产生的不良影响，故也需建立该 化合物在动物可食用组织中残留的快速、灵敏的检测方法。本论文通过抗原和抗体的制各及半抗 原的改造，进行了在动物可食用组织中喹烯酮残留的ELIsA快速检测的方法学研究。 本论文研究首先以邻硝基苯胺为起始原料，经四步反应获得了高纯度的残留标示物3．甲基 ．喹嚼啉一2-羧酸(MOcA)。并利用其分子结构中已有的羧基为偶联位点，以碳二娅胺法和蛋自进 以两种偶联物为不同免疫原、采用不同的免疫时间间隔免疫新西兰大白兔，获得多克隆抗体，抗 体效价测定和特异性鉴定的实验结果表明：两种免疫原均能产生高效价的抗体。免疫间隔延长有 利于效价提高，且以RsA为载体有利于避免针对蛋白载体的抗体产生。但间接竞争性ELIsA法 对抗体的灵敏度测定结果表明，Ic50值较高，不能满足残留检测的要求。 本论文认为导致EuSA检测灵敏度较低的原因，是残留标示物和蛋白偶联后的特征结构发生 改变。诱导产生的抗体不能够对游离MQcA很好的识别．因此，本论文设计了能够最大化保留 MOcA结构特征的系列半抗原结构，并对其合成路线进行了筛选和优化，最终以对甲基邻硝基苯 胺为起始原料，经氧化环化、澳代、水解、Beimt缩合、还原、水解六步反应制各含羟甲基结构 的MQcA衍生物7一羟基甲基一3一甲基一喹嗯啉一2一羧酸，为制备对游离残留标示物高亲和力的抗体， 高灵敏度的ELISA残留检测方法的建立奠定基础。 关键词： 喹烯酮，ELIsA，抗体，半抗原，化学合成 lI Abstract isanew china．Bec卸se Quinoce咖edrugof(沁inoxlinesby ofthe10wer deveI叩ed tox主cnyandhigher withotller isconsideredasa and feed actiV蚵compareQujnoxliIles，Quinoc乩one safIy h礓血e塌ciency additiVe．UsedasaIlanimal effbctfor chainmustbe medicine，i拓sidepersonthmu曲food aIle丘bctive肌dse珊itivememodtodetecttlleresidueofthis inanimaledible 如Vesti静ted．So compourld tissuemustbe c删edouta of tllis咖esis，we developed．In studyantigens”thesis，a11tibodyproduction t0 锄d altemtion a andsensi蛀vedetec虹onmetllodof fesidue．n hapten developquicky QIlinocetone’s animaIedible6ssues． Inmis stIldy，we s州hesized3-met}lyl-quinoxaline-2-carboxylicacid(MQcA)witll900dpurny fmm2-ninDanilineViafollr u∞dthc asfullction