应用MALDI-TOF质谱技术分析和鉴定食源性致病菌分析研究.pdfVIP

摘 要 食品中的致病细菌是引起食物中毒的主要原因之一，不仅导致人类多种疾病 的发生，而且严重威胁着人们的健康并造成经济损失。快速、准确的检测和鉴定食 品中的致病菌，进而有效预防和控制病原菌感染，一直是微生物学家及有关科研工 作者所追求的目标。最近发展起来的MALDI-TOF质谱分析技术已广泛应用于生命科 学及相关领域，而作为检测和鉴定多肽、蛋白质等生物因子的有效工具，在微生 物鉴定检验中的研究及应用刚刚起步。 本论文基于MALDI—TOF质谱分析技术对常见的五种食源性致病菌的鉴定检验 进行了系统研究。首先，选取大肠杆菌0157：H7为试验菌株，研究了不同培养条 件、不同基质、不同前处理方法和重复性分析对细菌蛋白质谱图的影响，并建立 了应用MALDI—TOF技术分析和鉴定食源性致病菌的规范性方法。该方法前处理简 单，对单个菌株的分析时间仅为2-5min。其次，采用此方法对供试的李斯特菌、 沙门氏菌、大肠杆菌、阪崎肠杆菌、金黄色葡萄球菌进行分析的结果表明，在质 荷比(m／z)2000-15000Da范围内，根据MALDI—TOF分析得出的细菌特征性的质量 图谱中出现的特异性的蛋白质或多肽离子峰而实现区分和鉴定的目的。同一批和 不同批次重复分析的结果显示，方法的重复性和细菌特征性蛋白质谱图的重现性 较好。根据此规范性方法和实验结果，初步建立了食源性致病菌蛋白质图谱数据 库。应用MALDI-TOF分析方法可实现在细菌属、种、菌株和血清型水平上对食品 病原菌快速、准确地区分和鉴定，显示出广泛的应用前景。 关键词：MALDI—TOF质谱技术；分析；鉴定；食源性致病菌 andIdentificationofFood—borne Analysis pathogensby MALDI—TOFmass spectrometry Abstract Commonfood·borne arethe reasonforfood pathogensimportant poisoning，which are associatedwith humandiseasesandresultedinseriousthreatfor closely many healthandeconomic detectionoffood—borne and people loss．Rapid，reliable pathogens effective orcontrolof infectionare of objective prevention pathogen always mass is andrelevantresearchers．MALDI-TOF microbiologist spectrometrymostly infieldofchemical a toolfordetectionand andlife applied science，aspowerful identificationof and itisusedfor and bio—moleculeslike protein，while an