产细菌素乳酸菌筛选、细菌素的纯化及其特性研究.pdf

摘 要 本实验从分离自内蒙古传统乳制品中的’135株乳酸菌中，通过纸片法初筛、牛津 杯法复筛，得到一株具有广谱高效抑菌活性的细菌素产生菌WIll2—2．1。经常规生理 生化及分子生物学实验，鉴定该菌为戊糖乳杆菌(I,actobacillus pentosus)。同时，本 文对影响厶pentosusWHl2—2—1产细菌素抑菌活性的因素以及该细菌素的生物学特 性进行了分析，并对该细菌素的纯化进行了初步研究。主要研究结论如下： (1)影响L．pentosusWHl2．2．1产细菌素抑菌活性的因素：指示菌种类及其浓度、 培养基种类、培养时间及有机溶剂和其他抑菌物质的添加等因素均对细菌素抑菌结果 有影响。￡．pentosus 为2．0X 106cfu／mL的蜡样芽孢杆菌具有最佳的抑菌效果。且Tween80对该细菌素的 产生有一定的刺激作用。同时，三．pentosusWIll2．2．1产生的细菌素与其他抑菌物质 协同作用也可增强其抑菌效果。 2．0时活性最高， (2)细菌素生物学特性：L．pentosusWHl2．2—1所产细菌素在pH 显示活性的pH范围为2．0．6．0，且在此pH范围内该细菌素对热有耐受性。用各种蛋 白酶处理后发现，它对胃蛋白酶、木瓜蛋白酶不敏感，但对胰蛋白酶和凝乳蛋白酶敏 WIll2．2．1所产细菌素的抑菌谱广，不仅对乳酸菌和非乳酸菌属的革 感。三．pentosus 兰氏阳性菌(如蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、李斯特氏菌)有抑制作用，对革兰 氏阴性菌(如大肠杆菌、鼠伤沙门氏菌、弗志氏贺氏菌)也有抑制作用。L．pentosus WHl2．2．1所产细菌素的抑菌作用效果明显，在6．10小时内可降低蜡样芽孢杆菌活细 胞2．3个数量级，但不能杀死细菌。同时，它与产Nisin菌株L．／act／sPCM2379相比， 二者抑菌效果基本相同。 WIll2．2·1所产细菌素。发酵液经超滤分离后，分子量在3k以上5k以下的组分对蜡 样芽孢杆菌具有最为明显的抑菌效果：将其层析分离后，分离出三种组分，第二个峰 的组分具有最强的抑菌活性。结果表明，该细菌素的主要抑菌活性成分分子量介于 3k-5k之间，是一种小分子多肽类物质。层析分离出的第二个峰的组分有待于进一步 的研究。 关键词：戊糖乳杆菌；细菌素；抑菌特性；超滤；层析 on of LacticAcid StudyScreeningBacteriocin··producing ofBacteriocin Bacteria、PurificationandCharacterization Abstract． Abacteriocin strainWH12．2．1wasscreenedfromseverallacticacidbacteria producing from inInner methodand whichwereisolatedtraditional Mongoliabyscrip products method．The ofWH12-2—1had bacteriostafic cylinder-dish supematant strong activity was several bacteriaand bacteria．Thestrainidentified against gram-p