omgp不同结域在神经突起生长抑制中的作用研究.pdf

摘 要 OMgp(OligodendrocyteMyelineGlycoprotein)是表达于寡突胶质细胞表面的一 种GPI连接的糖蛋白，对OMgpmRNA在中枢神经系统(cNs)的表达进行测定发 现，在许多神经细胞表面也表达有OMgp。但目前对它们的功能还不清楚。2002 年，Wang等人用磷脂酶处理CNS髓磷脂，对释放出的蛋白质进行神经突起生长 抑制能力的筛选，结果发现OMgp是唯一的抑制性蛋白，在体外具有抑制神经突 起生长和诱使生长锥溃变的功能。后来的研究表明，OMgp与另外两种神经突起生 长抑制因子Nogo-A和MAG竞争同一个受体NgR介导其抑制性信号的传导。研究 表明，这三种抑制因子在序列上并没有同源性，因而推测三者的结合位点可能有部 分重叠。 对十四种动物OMgp的蛋白序列分析发现，OMgp由几个部分构成：富含半胱 氨酸的结构域(cR)、富含亮氨酸重复序列的结构域(LRR)和富含丝／苏氨酸的结 构域。其中LRR结构域极为保守，在十四种动物中一致性达到86％以上。这提示 该结构域可能对其功能具有重要意义。 为了对OMgp结构与功能的关系有进一步的了解，我们克隆了小鼠OMgp cDNA，按照其结构特征分段表达了含有不同结构域的OMgp蛋白。通过与表达有 NgR的CHO细胞的结合实验、GST沉降实验和对原代培养的海马锥体细胞的抑制 LRR在其神经突起生长抑制功能中起重要作用，单独的LRR结 试验证明，OMgP 构域具有与全长OMgp蛋白几乎相同的神经突起生长抑制功能，而删除了此结构 域的蛋白则失去了对神经突起的抑制作用。含有部分LRR结构域的蛋白也有较强 的作用，这提示，OMgp在完成其神经突起抑制功能时，可能并不是每个亮氨酸重 复序列结构域都是必须的。 为了进一步鉴定OMgp与NgR作用的最小单位，本研究使用基因突变法分别 LRR的不同亮氨酸富含重复序列，表达蛋白后对其功能进行研究。 删除了OMgp 而删除了第181．228位氨基酸的LRR蛋白虽然仍具有结合NgR的功能，但却失去 了对神经突起的生长抑制功能。这提示，在OMgp与NgR结合时，可能存在多个 结合位点，而LRRl81．228则可能是OMgp最重要的功能结构域。 有结合NgR的功能，有可能作为神经生长抑制因子的竞争荆用于促进CNS损伤后 神经的再生。 由于目前还未得到OMgp的晶体结构，本研究使用同源模建的方法模拟了 OMgp的三维结构并进行了初步分柝，为进一步对神经突起生长抑制因子与配体相 互作用及神经再生的研究奠定了基础。 II Abstract 01igodendrocyte a Myeline Glycoprotein(OMgp)is 1inked ontheextemalsurface glycoproteinmainly of expressed oligodendrocytes． Interestingly，the is embeddedwithinallintronofthe OMgpgene large neurofibromatosis andonthe strand．Thedistribution typeI(NFl)gene opposite analysis of mRNAincentralnerves that in 0Mgp system(CNS)showed