1、红曲菌两种的荧光代谢产物的研究;2、脱氧雪腐镰刀菌烯醇胶体金免疫层析试纸条的研制.pdf

摘要I 摘要I 红曲在我国古代也称“丹曲”，传统的红曲是指以大米为原料，接种红曲菌经固体发 酵而成的红曲米。红曲在中医上具有健脾化食、燥湿化痰、活血化瘀等功效；工业上常 用于制作红曲米酒和腌渍肉、鱼等。红曲中含有多种代谢产物，例如醇类物质、酶类物 质、有机酸、红曲色素、莫纳可林K(Monacolin 大部分代谢产物具有降血压、降血脂、抗菌、抗氧化和抗癌等重要的生理活性。红曲菌 发酵代谢产物成分复杂，虽然已有较多代谢产物被分离和鉴定，如红曲色素、MK、桔 霉素等，但有关红曲中荧光物质的报道甚少。 本论文的第一部分分离和鉴定了红曲中两种新的荧光物质，并对其部分性质进行了 研究。主要研究及结果如下： 1采用硅胶柱层析和半制备型HPLC首次分离、纯化得到了红曲中两种新的荧光物 质。两者的紫外吸收光谱相似，分子量分别为356和384，命名为monasfluore A(MFA) 和monasfluore 激发波长和发射波长分别为kex=396姗和7忆m=460 为MFB类似物，两者的基本骨架完全相同，具有相同的多聚酮发色团结构，两者之间 分子量相差28，只是侧链相差两个亚甲基，MFA含有6个碳原子的己基侧链，而MFB 类代谢产物。 nlm SymmetryC18(5pm，250x4．6I．D．)和乙腈一水(77：23，V／v)流动相作为分离条件； Zzx=396nm，Lem=460 nm作为荧光检测器的检测波长，以自制的MFA和MFB为对照 范围为O．5．10 为Y=2376．6X+1346．4，相关系数R--0．9972，线性范围为0．25．5 ng／mL，MFB的平均回 收率为82．3％，相对标准偏差为5．3％。多次测定的相对标准偏差均小于3％，具有较好 的重复性和稳定性。采用建立的HPLC方法检测了经20株红曲菌发酵的大米，结果发 现不同红曲菌株发酵的大米中，MFA和MFB的含量不一，其中含量最高的为13号菌， 摘要I MFB含量最低，分别为O．01 g,／kg和0．003班g。 行了研究。结果发现，MFA和MFB的热稳定性和光稳定性差，在酸性条件下比碱性条 侧链，具有更强的亲脂性，与BSA之间的疏水作用更强。 为16．3和10．6 MFB对细胞抑制的作用明显强于MFA，提示可能与两者的侧 gg／mL。 链长度不同有关。 关健词：红曲菌；荧光物质；分离纯化：结构鉴定；稳定性 Il 摘要Ⅱ 摘 要Ⅱ 于小麦和玉米等谷物及其制品中，对人类和动物构成很大的威胁。目前，有关DON的检 测方法主要有薄层层析法、气相色谱法(采用电子捕获检测器或质谱检测)、液相色谱法 (采用紫外、荧光、质谱或质谱．质谱检测)和ELISA等。上述方法不仅检测设备昂贵、 样品前处理复杂、耗时费力，而且需要专业人员操作，难于在基层普及和推广，更不适 合现场和野外大规模的快速检测。 本研究第二部分研制了谷物及其制品中DON的胶体金免疫层析快速检测试纸条。该 试纸条准确灵敏、特异性好、操作简单、快速，无需昂贵的设备，适合于现场和批量样 品的检测分析。主要研究及结果如下： 1对金标抗体的制备的主要影响因素进行了研究。采用EUSA测定标记的金标抗体 离心后的上清液与参照液中抗体含量，确定了胶体金最佳标记pH值为7．O；采用盐析滴 定法确定了制备金标抗体最适标记抗体量为30∥咖L。 2优化了试纸条的工艺条件。选用P40膜作为层析膜；金标抗体的稀释度为1：3(即 稀释3倍)；P40膜上喷有浓度分别为800∥咖L和1 剂，能很好的消除试纸条上金标抗体与检测抗原之间由于静电作用而产生的非特异性吸 附。 3该试纸条的灵敏度较高，为50ng／mL；特异性较好，该试纸条与黄曲霉毒素B1、 玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A、T-