共轭亚油酸高产株的诱变选育及其在发酵乳上的应用研究.pdf

摘 要 Linoleie 共轭亚油酸(ConjugatedAcid，简写CLA)是一种含有18个碳原子的不饱和脂肪酸， 研究发现它具有多种生理活性，例如抗癌、减肥、增强免疫力等。它是人体必需脂肪酸一亚油酸 组成复杂，还含有很多反式脂肪酸，限制了其在食品行业的应用；除此，在化学合成过程中涉及 高温高压操作，耗能高、污染大、危险系数大，增加了企业的投资成本。研究发现，由微生物转 化LA生产CLA具有诸多优点，无污染，反应条件温和，不涉及强酸强碱，对设备要求低，合成 产物异构体较单一，利于分离纯化等，逐步被广大科研工作者重视。 本文主要从实验室保藏的一株有CLA合成能力的植物乳杆菌入手，对其进行诱变处理，以 期提高该菌株的发酵能力，获得高产菌株；研究了影响该菌株发酵能力的因素，并利用响应面分 析法优化了发酵工艺：利用该菌株的活细胞作为细胞酶，探索了在超临界状态下CLA的转化试 验；最后将该高产菌株应用在富含CLA发酵牛乳的研制上，研究获得了最佳的发酵条件。主要 结论如下： l、利用矿注入、亚硝基胍复合诱变法，对原始菌株进行诱变处理，获得了一株高产CLA 的突变菌株，命名为L．plantarum M．66合成CLA M-66。较出发菌株的发酵能力，L．plantarum 的产量提高了47％，达到1 971tg／mL。 2、在单因素试验的基础上，运用中心组合试验设计原理采用5因素3水平响应面分析方法 对影响突变株L M-66发酵能力的因素进行了优化，结果为：反应时问30h，反应温度 plantarum 平均产量为224．1 8．68％。 ltg／mL，转化率为l 3、对超临界C02状态下利用L．plantarumM-66湿细胞转化LA生成CLA的反应体系进行了 研究，最适pH值为7，最适温度为37℃，最适底物浓度为lmg／mL，最适细胞酶浓度为25％， 最适压力为15MPa，在此条件下CLA的产量为60099／mL，转化率达到60％。 4、开展了该突变株在富含CLA发酵乳上的应用研究，选取商业发酵剂YO-MIX 495(嗜热链 M．66作为试验发酵剂，考察酸度、CLA两个指标， 球菌、保加利亚乳杆菌)和突变株L．plantarum M-66：商业发酵剂=3：l，最佳的 并辅以感官评定打分，确定了最佳的发酵菌种配比为L．plantarum 发酵温度为37℃，接种量为4％。在这个条件下所得到的酸奶色泽呈乳白色，且凝同性良好，组 织均匀，酸味甜味适中，总体感官评价达到了国家标准的要求。利用气相色谱分析法确定了本试 验研制的酸奶中CLA含量较没有添加L．PlantarumM-66发酵得到的酸奶中CLA含量为 关键词：植物乳杆菌，共轭亚油酸，N+注入，诱变，超临界c02 Abstract linolcic tobeafunctional which aseriesof acid Conjugatedacid(CLA)hasproved fatty prodded suchas on．CLA function andSO physiological anticancer,reducingbodyfat，improvingbodyimmunity can as