海地瓜总皂苷提纯化工艺及生物活性研究.pdf

海地瓜总皂苷提取纯化工艺及生物活性研究 摘 要 海洋中蕴涵着丰富的天然资源，是一个巨大的天然药库，人类在面临着各种疑难杂症、 顽固疾病的严重挑战以及陆地药源越来越不能满足人们需求的前提下，海洋宝贵的资源无 疑是人类最青睐的选择，许多国家已经越来越重视海洋中天然产物的研究和开发。我国海 域辽阔，海洋物产丰富，并且具有悠久的海洋用药历史，拥有天然的优势。为在国际舞台 中争得一席，发展海洋蓝色药物对我国来说无疑具有重要战略意义。海参作为一种食品和 药材，具有很高的保健功能和药用价值。海参皂苷是海参体内的一种次生代谢产物，具有 广泛的生理药理活性，潜藏了极大的应用价值。本文以海地瓜为研究对象，研究了其总皂 苷的提取分离纯化工艺，并进行了部分药理学活性分析，为海地瓜的综合开发利用提供理 论依据。 (1)对海地瓜体壁的基本成分进行分析，得出结果为：水分含量89．64％，蛋白质含量 酸组成总量达8．22％，除去组成粗蛋白的氨基酸外，还有0．29％的游离氨基酸，其中甘氨 酸含量最高，甲硫氨酸含量最低，必需氨基酸有7种，总含量为1．96％，非必需氨基酸有 9种，总含量为6．26％，氨基酸组成较为完善，说明海地瓜的营养价值较高，是一种高蛋 白低脂肪的食品。此外，以人参皂苷Re为标准对照，香草醛．冰醋酸．高氯酸做为显色体系， 建立海地瓜皂苷含量测定方法，光谱扫描得到了最佳参比波长537nnl，线性回归方程为 gg／mL之间与吸光度值呈良好线性关系， y=0．0038x+0．0071，r=0．9996，表明浓度在40-200 重复性实验RSD=3．15％，说明方法学各指标均符合要求。应用该方法来分析不同提取方法 及前处理对海地瓜总皂苷的提取效果，结果表明醇提法提取效果最好，鲜品海地瓜经醇提 14％。 的皂苷得率为0．036％，冷冻干燥处理的干品海地瓜经醇提的得率最高，达0．5 (2)对海地瓜体壁总皂苷的提取工艺进行优化，采用鲜品醇提法。海地瓜总皂苷提取 工艺单因素试验结果为：乙醇浓度70％，提取温度70℃，提取时间3h，提取次数3次， 料液比1：2．0 g／mL。海地瓜总皂苷提取工艺响应面分析结果：乙醇浓度为75％，提取温度 为73．5℃，提取时间为165min，料液比为1：1．8 g／mL，共提取3次。在该条件下重复实验 3次测得平均皂苷得率为0．0378％。 对海地瓜粗提液的分离纯化效果，筛选出D101大孔树脂为最合适的树脂型号，以D101 型号大孔树脂对海地瓜粗提液静态吸附一解析工艺进行研究，得出最佳条件为：称取已处理 mL，放恒 过的经真空抽滤的D101大孔树脂1．0g，加入质量浓度为4．0mg／mL样品液60 温摇床q](2s。c，120r／min)振荡吸附90 min，过滤，树脂用蒸馏水反复冲洗，真空抽滤， 先加入30％乙醇去除杂质，过滤，再用60 mL浓度为80％的乙醇进行解析，于恒温摇床中 (25。C，120r／min)振荡120 瓜粗提液动态吸附-解析工艺研究，得出最佳条件为：取浓度为3．6 mg／mL海地瓜皂苷粗提 液160mL上柱，上样流速为2．5 mL／min，依次用140 mL mL去离子水洗去水溶性杂质，140 mL 30％乙醇溶液去除杂质，15090％乙醇溶液洗脱海地瓜总皂苷，洗脱流速均为1．5 mL／min。所得皂苷纯度达71．3％。 (4)对海地瓜总皂苷进行溶血试验和急性毒理试验，结果为：海地瓜总皂苷具有极强