侧孢短芽孢杆菌-12-86海洋溶菌酶的研究.pdfVIP

侧孢短芽孢杆菌S—12—86海洋溶菌酶的研究 摘要 侧孢短芽孢杆菌s．12．86海洋溶菌酶发酵液经离心超滤、CM Fast G．1 oo凝胶柱层析 SepharoseFlow阳离子交换柱层析和Sephadex 纯化得到电泳纯的海洋溶菌酶，其中阳离子交换柱层析纯化效果最为 明显，去除了大部分杂蛋白。海洋溶菌酶发酵液经纯化最后比活达到 3279．5 U／mg，纯化倍数为34．7，活力回收为24．1％。 对纯化海洋溶菌酶理化性质研究表明，该酶分子量约为39kDa， 酶对溶壁微球菌的最适作用温度为35。C，最适作用pH为8．0，在高 于和低于354C时酶活下降都比较缓慢，5C时仍保持一定活性，相对 酶活为25％，因此海洋溶菌酶是一种低温碱性酶。海洋溶菌酶稳定性 5．0．10．O之间稳定性均较好，相对酶 较好，在pH6。5时最稳定，pH 活在80％以上；海洋溶菌酶在小于50。C时有较好的热稳定性，50℃ 和cu2+对海洋溶菌酶具有一定的激活作用，Mn2+和Ag+对海洋溶菌 酶略有抑制作用，其它金属离子如Ban、Ca2+和Fe3+等对酶活没有 显著影响；化学试剂无水乙醇、NaCl、酒石酸等和增稠剂壳聚糖、果 胶、琼脂、阿拉伯胶等对酶活几乎没有影响，其它一些常见化学试剂 及增稠剂对海洋溶菌酶略有激活作用，说明海洋溶菌酶与大部分金属 离子、化学试剂和增稠剂有良好的配伍性。 以多种常见标准菌株、临床分离致病菌株及养殖常见致病菌株作 为检测指示菌株，采用倍比稀释法测定了海洋溶菌酶对这些菌株的作 用。结果表明海洋溶菌酶抑菌谱广，对检测指／j÷菌株都有不同程度的 抑制作用，尤其对临床分离致病菌株及养殖常见致病菌株都有较强的 作用，因此可以作为抗菌消炎药物或环保型饲料添加剂，部分代替或 代替抗生素以解决抗生素带来的抗药性和药物残留问题。 海洋溶菌酶对实验菌株的生长繁殖和代谢均有影响，抑制作用主 要发生在指数期初期。海洋溶菌酶作用后大肠埃希氏菌的细胞质固 缩，导致质壁分离，部分细胞壁缺失，细胞膜破裂，菌体变形，有些 细胞质解体出现空腔；金黄色葡萄球菌细胞质不均匀，固缩较严重， 中间有颜色较深成团物质出现，细胞壁变薄，有些细胞壁模糊不清， 存在质壁分离现象，但未出现和大肠埃希氏菌类似的明显空腔。 海洋溶菌酶对细菌的作用是一个复杂的过程，最终效果可能是作 用于多个部位产生效果的叠加。推测海洋溶菌酶抑菌主要有以下两种 作用：一种是海洋溶菌酶水解细胞壁中的糖苷键，破坏了细胞壁结构 使细胞壁出现部分缺失，失去了对细胞的保护作用，细胞质解体出现 空腔；另外一种作用是海洋溶菌酶渗透进入细胞内吸附细胞内的细胞 质，发生絮凝作用，扰乱细胞正常的生理活动。因为两种细菌的细胞 壁结构不同，两种作用对其影响程度也不同，对于大肠埃希氏菌前一 种作用占主要地位，而对于金黄色葡萄球菌后一种作用占主要地位。 海洋溶菌酶与蛋清溶菌酶及其它动植物来源溶菌酶和其它微生 物来源的溶菌酶相比具有独特的优势，最适作用温度较低，稳定性好， 溶茵谱广泛，对革兰氏阳性、革兰氏阴性菌和真菌均有不同程度的抑 制作用，尤其是对多种致病菌有较强的作用。海洋溶菌酶来源于从东 海底泥中筛选得到的侧孢短芽孢杆菌s．12-86，海洋的恶劣环境导致 海洋微生物在基因组成、生态功能、代谢系统和防御系统上的多样性， 所产生的代谢产物与陆生生物的代谢产物相比具有独特的性质。由于 不同来源的溶菌酶性质不同，混合使用具有协同作用，将大大拓宽溶 菌酶的应用领域。 为了开发海洋溶菌酶产品在临床上应用治疗阴道炎，通过大鼠阴 道混合感染金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌的动物模型，观察了海洋 及小剂量(2．5mg／kg)对大鼠阴道金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌混合 引起的细菌性阴道炎均能达到不同程度的转阴，治疗作用明显，治愈 程度分别为92．9％、82．1％和64-3％，且有一定的量一效依赖性。 关键词侧孢短芽孢杆菌，海洋溶菌酶，纯化与性质，抑菌效果， 抑菌机理，阴道炎 Marine