共振光散射技术核酸分析上的应用.pdfVIP

摘要 核酸是遗传信息的载体和基因表达的物质基础，在生命科学中起着十分重要的作 用。核酸研究是现代生物学、生物化学和医学中重要的研究领域。在核酸的化学研究 领域中，小分子用作癌化学治疗剂、核酸染色剂及结构探针等一直是非常活跃的研究 方向。而化学以其先进的设备和灵敏的检测手段，为核酸的研究提供了坚实的基础。 共振光散射技术(Resonance Light 分析技术，因其灵敏度高、操作简单等显著特点而备受关注。共振光散射技术简化了 光散射分析的仪器设备，操作简单易行，有利于对大批量样品的测定。因此共振光散 射技术在化学分析中有着广泛的实用价值和应用前景。 本文采用共振光散射技术建立了几种新的DNA分析方法，并利用共振光散射技 术探讨了小分子物质与DNA的作用机理。全文分为三个部分： 第一部分：DNA在有机酸介质中的共振光散射光谱研究。 在甲酸、乙酸、丙酸、正丁酸、三氯乙酸、三氟乙酸介质中小牛胸腺DNA的共 振散射光谱都有不同程度的增强，而在三氯乙酸介质中，小牛胸腺DNA的散射光强 度最大、稳定性最好。O．2mol／L的三氯乙酸介质中，小牛胸腺DNA在0．05 gg／mL～50 1．tg／mL、鱼精子DNA在O．05lag／mL～40 gg／mL的范围内散射光强度与浓度有着良好 的线性关系，检出限为12．24ng／mL的小牛胸腺DNA和17．94 ng／mL的鱼精子DNA。 浓度为4I_tg／mL的核苷酸、O．1 浓度时对小牛胸腺DNA在三氯乙酸介质中的散射光强度没有影响，由此建立了一种 三氯乙酸作为共振散射探针测定DNA的新方法。该方法已成功用于四个合成样品中 小牛胸腺DNA和鱼精子DNA含量的测定。 第二部分：阿霉素与DNA作用的共振光散射研究。 的加入导致阿霉素的共振光散射光谱增强，在322nm与564nIIj处产生两个强烈的共 gg／mL、鱼精子DNA的浓度在0．08-8p．g／mL内呈良好的线性关系，检出限分别为 36．8 ng／mL的小牛胸腺DNA和40．1 白质、10p．g／mL的核苷酸都不干扰DNA的分析测定，大多数金属离子的允许浓度 由于DNA与阿霉素相互作用的特异性，该分析方法具有较高的选择性。 第三部分：多胺与DNA作用的共振光散射研究。 研究了三种常见多胺与小牛胸腺DNA作用的共振光散射光谱。发现在 pH=2．21-9．15的Britton—Robi 振光散射光谱的增强，在343 nm处产生强烈的共振散射峰。小牛胸腺DNA的浓度 在0．1-40 gg／mL的范围内有良好的线性关系和较高的灵敏度，相关系数为0．9989， 检出限为19．05 ng／mL。浓度为10Hg／mL的蛋白质、10 gg／mL的核苷酸都不干扰 DNA的分析测定，金属离子的允许浓度较低，一般为1．0x10～mot／L。由此建立了一 种在生理活性pH下测定DNA的共振光散射分析方法。 关键词：脱氧核糖核酸(DNA)；共振光散射(RLS)；三氯乙酸；阿霉素；多胺：精 胺 ofResonance ForTheDetermination Smdy LightScatteringTechnique ofNucleicAcids Shuo Feng and SpeciNty：AgriellRuralProcessingStorageEngineering DirectedProf