蜂花粉中有效成的提取及功能性研究.pdf

1111Ii l 11111111111l lIllll111111111IIIII Y1 摘要 摘 要 花粉是植物的雄性生殖细胞，含有丰富的各种营养成分，在国际上有“天 然完全营养素的美誉。玉米花粉多糖具有抗肿瘤、抗氧化、增强免疫力等功 能，但坚硬的花粉壁阻碍了多糖成分的溶出，降低了提取效率。动态超高压微 射流技术是一项新兴的高压均质技术，其剧烈的处理条件可导致植物细胞破碎， 且对活性成分几乎无破坏。 本研究侧重于应用动态超高压微射流技术对玉米花粉进行破壁，并与干法 粉碎破壁、复合酶酶解破壁比较破壁效果和多糖得率，在此基础上对玉米花粉 多糖抗氧化活性功能进行了评价，为今后玉米花粉多糖更深入的研究与开发奠 定基础。同时对花粉中有助于治疗前列腺疾病的功能因子～坏氧肟酸进行了定性 和定量分析。本论文的主要研究内容与结论如下： 1、以葡萄糖为对照，优选葸酮．硫酸法测定玉米花粉多糖的含量。结果表 明：玉米花粉多糖的吸收光谱与葡萄糖基本一致，标准曲线的线性关系良好 (R2=O．9996)，此法在回收率、精密度、稳定性方面均较好，可作为测定玉米 花粉多糖含量较为理想的方法。 2、采用正交试验优化干法粉碎花粉并提取多糖的条件，结果表明提取溶液 pH值对多糖得率有极显著的影响，最佳条件为：取粉碎并过120目筛分的花粉， h，提取两 调节花粉乳液pH值7．0，料液比1：15，提取温度70℃，提取时间3 次，此时多糖得率为7．239％。 3、采用果胶酶和纤维素酶组成的复合酶对玉米花粉进行酶解破壁处理，通 过正交试验优化酶解条件。结果表明果胶酶添加量是影响花粉多糖得率的最主 要因素。最佳条件为：果胶酶添加量300U／g花粉，纤维素酶添加量150U／g花 粉，20％花粉乳浓度，pH4．5，50℃酶解破壁5h，在此条件下多糖得率为7．194％。 4、采用动态超高压微射流技术对玉米花粉进行湿法破壁处理， Box—Benhnken响应面设计优化条件参数。结果表明均质压力和提取温度对多糖 得率的线性效应和曲面效应均显著。最佳提取条件为：微射流均质压力127 MPa，均质处理一次，料液比1：20，72．4℃下提取1．7h，提取2次，此时玉米 花粉多糖得率达到理论最大值8．086％，与验证试验结果一致。与干法粉碎和酶 摘要 解破壁提取结果相比，提取时间缩短了1．3h，多糖得率提高了0．847％。 5、红外光谱扫描的结果表明三种破壁方式提取的多糖的红外光谱图基本吻 合，主要官能团没有差异，说明使用高压微射流技术不会破坏玉米花粉多糖的 结构。高倍扫描电镜观察破壁效果的结果表明：干法粉碎和酶解破壁处理的花 粉仍有少量未完全破壁的花粉颗粒，粒径不均匀，可见原材料的粉末特征；而 经微射流均质处理的花粉均完全裂解为大量碎片，粒度明显变小，内容物全部 溢出。因此，超高压微射流技术处理花粉的破壁效果最好。 6、初步探讨超高压微射流技术使花粉破壁的机理是：高压均质过程中剧烈 的处理条件使花粉细胞的组织结构完全破碎，原来颗粒比较粗大的花粉乳液被 加工成颗粒非常细微的乳浊液，使花粉细微颗粒充分与提取溶剂相接触，从而 提高提取效率。 7、通过紫外扫描和HPLC．MS对舍尼通药片提取物进行定性分析，最终确 G．25和G．10二者联用对玉米 定其为环氧肟酸，纯度约为94％。采用Sephadex 花粉DIBOA提取液进行纯化，经HPLC定量分析并计算得到玉米花粉中环氧 肟酸的含量约为0．029％(290t．tg／g)。 8、玉米花粉粗多糖和精制多糖组分PPMC对DPPH、02·‘和·OH自由基均有一 定的清除作用，并且随着多糖浓度的增大清除作用增强。二者对DPPH的清除