白果活性蛋白的离、纯化、结构及其生物活性研究.pdf

—— 一———一二——』坠—兰L———————————————————————一 摘要 银杏资源以其显著的生物活性及药理作角而引起世界各国科学家的广泛关注。白果 作为传统的中药材已有600多年的历史，但对其主要活性成分知之甚少。近年来，仅有 少垦研究表明白果具有延缓衰老、耐缺氧、抗疲劳和止咳平喘等功效。为探明白果中的 活日．成分，本文以白果蛋白为研究对象，采用现代分离技术和先进的分析测试手段及动 物学实验方法首次从白果中提取 延缓衰老、抗氧化活性的新蛋白 并且对此蛋白进行了一级结构和 要结果如下： 1．白果活性蛋白的提取、分离、 根据不同地区白果的形状、颜色、口味、粒重等形态特征和白果中蛋白质、淀粉、 脂嘀、总酸、总酚、游离酚和类胡萝b素等主要成分的含量，选用泰兴大佛指白果为原 科进行研究。 以脱脂白果为原料，采用盐溶和盐析的方法，首次从白果中制备出清蛋白(GAP)、球 分折表明采取此工艺制得的GAP、GGP和GSP，其蛋白质纯度高，氨基酸组成丰富、合理， 属于二优质蛋白质。 蛋白分成为两个级分( I和 )。采用 ． 一 柱层析，进一步纯 IIa 1I GAP PAG0和化5A法x泳ed电ah，得到较均一,G的AP、pe法S析EA层E、D法度光光II分P，AG 质谱法鉴定其为具 有邑谱纯和电泳纯的样品。结合肽质量指纹图谱和肽序列标签法用于蛋白质数据库搜索， 搜索结果确认GAPIIa为未知蛋白质，从而证实了GAPIIa是本实验室从白果中分离出 的一种新的具有延缓衰老和抗氧化活性的蛋白质。 2．GAPIIa结构表征 II 离_F峰的半峰宽以及B一消除反应的实验结果进一步表明GAPa在Ser或Thr残基上以 。糖苷键方式连接了少量的糖，为一种糖蛋白。 氩睦酸序列，即肽质量数为19 成。这两个肽段共同存在于GAPIIa的两条肽链中。 兰!奎些查兰!!!!墨竖主兰些堡兰———————————————一 园二色谱、红外光谱和拉曼光谱的分析结果显示GAPIIa主要以0一折叠或卷曲结构 光光谱显示，在水溶液中GAPIIa分子中的Trp残基两种类型都存在，既有暴露于分子外 部的Trp残基，也有处于疏水内部的Trp残基。其溶液构象在pH7时最稳定，但酸碱度 11 a构象相对变化略大于在碱性环境。有机溶剂对其 对其构象影响较小，在pH7时GAP 构象变化影响较大。 通过扫描电镜和透射电镜观察，GAPIIa聚集态主要以大小不一的空心球状形式分布 于其他如片层、针状和蜂窝状形式之间。x一射线衍射分析结果表明经冻干得到的GAPIIa 粉末结晶度不高，但在结晶区其分子的规整性较高。 利用荧光光谱和紫外差光谱研究GAPIIa在变性剂盐酸胍作用下，蛋白质分子伸展 II II a抗羟基自由 与抗氧化活性关系时发现，虽然GAPa伸展度对活性有影响，但从GAP 基活性变化来看，其影响是有限的。总的来说，GAPIIa抗羟基自由基的活性比较稳定， 较少受到蛋白质变性的影响。 3．白果蛋白的生物活性研究 非脂质体系抗氧化实验、体外、体内抗生物氧化实验和果蝇生存寿命实验等结果表明 白果蛋白具有良好的抗氧化性能和延缓衰老的作用。GAP、GGP、GAP MDA生成和血和肝中过氧化物的含量，起到保护细胞膜和红血球的作用。通过饲喂，GAP 显延长果蝇平均寿命及最高寿命。这些结果提示白果蛋白延缓衰老的作用机理与白果蛋白 具有抗氧化作用有哭、。