海参岩藻聚糖硫酯抗肿瘤活性及作用机制的研究.pdf

海参岩藻聚糖硫酸酯抗肿瘤及作用机制的研究 摘 要 海参岩藻聚糖硫酸酯是海参体壁中重要的活性硫酸多糖，具有抗肿瘤、抗病 毒、免疫调节、降血糖和降血脂等广泛的药理活性，其活性受多糖支链和硫酸根 含量等结构影响。其中，美国肉参岩藻聚糖硫酸酯是一类具有很高粘度和较高相 对分子量的直连硫酸多糖，使用TSKG4000PWXL色谱柱测定其分子量达 435KDa。PMP法测定单糖组成，分析其单糖仅含有岩藻糖。离子色谱法测定其 硫酸基含量约为32．9％。本实验以美国肉参岩藻聚糖硫酸酯(SC．FUC)为研究 对象，通过建立体外化学缺氧模型和体内自发肺转移模型，系统地评价了 SC．FUC抗肿瘤活性及初步探讨了其作用机制。主要研究结果如下： 外抗肿瘤活性进行了筛选。结果显示，不同分子量的海地瓜SC．FUC低聚糖对体 外培养的肿瘤细胞的生长抑制作用不同，多种肿瘤细胞株对海地瓜SC．FUC低聚 糖的作用不敏感；美国肉参SC．FUC具有显著抑制肿瘤细胞增殖活性的作用，人 126．9799／mL，具有时间和剂量效应关系。 CoCl2对HGC．27细胞的生长无显著影响，且细胞HIF．1etmRNA的表达量较高， 故以浓度为259M的CoCl2建立缺氧模型。 采用MTT、AO／EB染色、TUNEL和RT．PCR法及Westem blotting法对缺氧 条件下SC．FUC体外抗肿瘤活性及其可能机制进行了探讨。结果表明：SC．FUC 和100．0499／m1)，改变细胞的周期，形成G2／M期阻滞，并诱导肿瘤细胞凋亡。 RT—PCR和Western 3的表达，增3nPARe．1的裂 Bcl．2、Bcl．xl的表达，上调Bax、细胞色素C和caspase 解。提示SC．FUC具有显著抑制缺氧条件下肿瘤细胞生长的活性，其作用机制可 能与阻滞细胞周期，并通过HIF．1Q及其介导的线粒体信号通路激活肿瘤细胞的凋 亡相关。 通过研究SC—FUC对缺氧诱导的HGC一27细胞转移活性及其作用机制，结果 表明，SC．FUC可显著抑制缺氧条件下肿瘤细胞的迁移(尸o．01)、粘附(JPo．05， blotting 尸O．01)和侵袭能力(PO．01)。在转录和翻译水平上，RT．PCR和Western 0I及其介导的MMP一2／．9的表达，上 法结果表明，SC．FUC可下调Hpa和HIF．1 调TIMP一2／．1的表达，从而通过降低肿瘤细胞外基质的侵袭能力而发挥抗转移作 用。 采用MTT法、体外小管形成和鸡胚尿囊膜实验，研究SC．FUC对肿瘤血管新 生的影响。结果说明SC．FUC能显著抑制内皮细胞的生长和新生血管的生成。 RT．PCR和Western mRNA和蛋白的表达。提示SC．FUC可通过抑制VEGF的活性抑制血管新生。 通过建立小鼠Lewis肺癌自发肺转移模型，进一步验证SC—FUC在体内抑制 肿瘤生长和转移的作用。结果表明，SC．FUC可以显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长 和肺转移，平均抑制率分别为45．6％和65．9％；可降低荷瘤小鼠肿瘤组织中 mRNA和蛋白的表达。提示SC．FUC能显著 HIF．1et、Hpa及MMP．2／．9、VEGF 抑制肿瘤细胞在小鼠体内的生长和转移，可通过降低ECM降解酶的活力，减少 VEGF的释放，从而抑制肿瘤转移和血管新生。 综上所述，本论文系统地研究了SC．FUC体外、体内抗肿瘤生长和转移作用， 并初步阐明了其抑制肿瘤生长、转移和血管新生的机制，为深入挖掘海参岩藻聚 糖硫酸酯药用价值，推动海参多糖的加工利用提供理论基础和科学依据。 关键词：美国肉参SC．FUC：化学缺氧：人胃癌HGC．27细胞；HIF一1a；凋亡； 周期阻滞；转移：血管新生；Lewis肺癌；转移灶 onanti--tumoreffectand Study themechanismofsea