t-2毒素对猪代肝细胞的毒性效应机制研究.pdf

摘要 T-2 毒素属单端孢霉烯族化合物，是该类毒素中毒性较强的一种，主要由镰刀菌 产生。T-2 毒素广泛存在于谷物食品中，人类和动物暴露 T-2 毒素会引发各种疾病， 畜禽暴露 T-2 毒素还可能致动物源食品残留，间接危害人类健康。掌握该化合物的致 毒机制对制定抗毒措施非常重要。本论文以不同剂量（0、0.02、0.05、0.1 μg/mL） T-2 毒素暴露的猪原代肝细胞为实验材料，运用基因芯片杂交和荧光差异双向电泳 （2-D DIGE）结合 MALDI-TOF MS/MS 生物质谱分析技术，分别从基因和蛋白水平 研究了 T-2 毒素对猪原代肝细胞的毒性效应及其机制，得到如下主要结果： 1. 基因芯片结果显示 0.05 μg/mL T-2 毒素暴露猪原代肝细胞后共有 1193 个基因 产生显著变化，包括 562 个表达上调基因和 631 个表达下调基因。这些变化的基因涉 及氧化还原、免疫反应、转运、蛋白酶解、细胞粘附、脂类代谢、凋亡等多个生物学 过程。用 Real-time 荧光定量 PCR 验证了参与肝脏外源物质代谢的 P450 家族基因 (CYP3A39、CYP3A46 和 CYP2C42)以及环氧化物酶 EPHX1 和羧酸酯酶 CES1C4 基 因，结果上述基因 mRNA 表达均呈现不同程度的升高，与芯片变化趋势相同，提示 这些酶可能参与了 T-2 毒素的体内转化和代谢过程。 2. 运用荧光差异双向电泳（2-D DIGE）技术研究 0.05 μg/mL T-2 毒素暴露后猪 原代肝细胞蛋白表达谱变化，发现了 260 个差异蛋白。选择剂量-效应明确，且界限 清晰的蛋白点，采用 MALDI-TOF MS/MS 生物质谱技术进行鉴定，成功鉴定出 84 差 异蛋白，包括 34 个表达上调蛋白和 50 个表达下调蛋白。用 Gene Ontology、KEGG 数据库以及 Pathway StudioTM (v7.0)软件分析发现它们主要参与蛋白结合、电子传递、 信号传导、应激反应、脂类代谢等生物学功能和信号通路。这些蛋白的改变可能与 T-2 毒素所致肝细胞损伤以及疾病形成过程有关。 关键词：T-2 毒素 DNA 芯片 CYP450 2-D DIGE 生物质谱 I ABSTRACT ABSTRACT AABBSSTTRRAACCTT Study on Toxic Mechanism of T-2 Toxin in Porcine Primary Study on Toxic Mechanism of T-2 Toxin in Porcine Primary SSttuuddyy oonn TTooxxiicc MMeecchhaanniissmm ooff TT--22 TTooxxiinn iinn PPoorrcciinnee PPrriimmaarryy Hepatocytes Hepatocytes HHeeppaattooccyytteess Guangxun Zou(Environmental Engineering) Guangxun Zou(Environmental Engineering) GGuuaannggxxuunn ZZoouu((EEnnvviirroonnmmeennttaall EEnnggiinneeeerriinngg)) Directed by Prof. Rimao Hua