酶联免疫吸附试验(ELISA)在食品安全快速检测上的应用创新.pptVIP

酶联免疫技术与食品安全快速检测 姓名:陈超 学号：201423104001 目录 ELISA概述 ELISA的常用方法 ELISA的应用 一、ELISA概述 酶联免疫吸附试验 (ELISA) ：是在免疫荧光和组织化学基础上发展起来的新技术。 主要是利用抗原与抗体的高特异性反应，通过合适的载体，使酶标抗原或抗体与待测样品反应，形成酶标抗原抗体复合物，在相应的酶底物参与下，复合物上的酶催化底物使之水解成有色物质。一定条件下，呈色物质与待测物的含量直接相关，因此可以根据呈色物质颜色的深浅，对待测样品进行定性定量分析。 基本步骤（以双抗体夹心法为例） 包被：将Ab包被到酶标板上,进行洗涤 封闭：封闭酶标板上的非特异结合位点 加样：将标准品、样品、阴性及空白对照样品加入酶标板，洗涤 加酶标抗体：加入酶标记的二抗，洗涤 显色：加入底物，在酶作用下发生显色反应 检测：检测有色溶液在490nm波长下的OD值 结果分析：绘制标准曲线，分析受检样品浓度 常用的标记酶有：辣根过氧化物酶、葡萄糖氧化物酶、碱性磷酸酯酶等。 这一类酶通常满足以下条件： 具有较高的催化专一性和活性 与抗原抗体偶联后不影响自身酶活性和抗原抗体的免疫活性 催化反应的信号产物易检测 价廉易得 对人体无害 二、ELISA的常用方法 夹心法 间接