几种新型重组葡球菌肠毒素生物功能的研究.pdfVIP

摘要 葡萄球菌肠毒素(Staphyloccucal 的一类结构相关、毒力相似的可溶性胞外毒蛋白，可引发急性肠胃炎及其它免疫 性疾病。已发现的肠毒素及肠毒素样基因型共20余种，但有关新型肠毒素的研 究主要停留于基因型检测水平。本课题主要研究了几种新型重组肠毒素的毒性和 超抗原活性，并初步探讨了蛋白分子结构和功能之间的关系。 应用构建的pET28a．ses重组载体经诱导表达、镍鳌合层析纯化，获得高纯 的六种重组蛋白和天然SEA，以PBS做空白对照，72h后取胸腺、脾脏和肝脏。 计算脏器指数并检测肝脏外源化合物代谢酶活性及IL．2、IL-4、IL-6、TNF．仅、 IFN叫JL种细胞因子的转录、表达水平。应用于体外细胞实验进一步评价肠毒素 7．5独立样本T 对T细胞增殖、凋亡和细胞因子转录、表达的影响。利用origin 检验法分析肠毒素处理组与PBS对照组差异的显著性。 导体外T淋巴细胞凋亡。 在499／mL剂量下，四种新型重组肠毒素(K、Q、G、O型)与经典天然 SEA相似，刺激体外T淋巴细胞增殖，具有超抗原活性，且超抗原活性强弱与T 细胞TCR的VB亚型和MHCll分子有关。按促进T淋巴细胞增殖能力的强弱排 序，肠毒素的超抗原活性由强至弱的顺序为：K、Q、A、G、O，U型肠毒素不 表现超抗原活性，这与根据蛋白分子0【3．B8环及zn离子结合位点结合能力所预 测的超抗原活性强弱顺序一致。在5I，tg／kg体内剂量和41tg／mL的体外剂量下，A、 综上所述，重组葡萄球菌肠毒素可引起机体肝脏外源化合物代谢酶的变化， 诱发炎症反应，具有一定的肝脏毒性； A、O、G、K、Q型肠毒素具有差异化 影响机体细胞因子转录，淋巴细胞分化的能力，表现出不同的超抗原活性。新型 葡萄球菌肠毒素毒性及其超抗原活性提出食品安全新问题。 关键阗：重组葡萄球菌肠毒素细胞因子实时荧光定量PCR细胞凋亡脏器指 数外源化合物代谢酶淋巴细胞增殖 ABSTRACT excreted solubleextracellular by Enterotoxins(SEs)areproteins Staphylococcal bacterial orthermonuclease strains，sharing plasma-coagulase positivestaphylococcus includedin acute smilarstructuresandvirulence，and family．Besides superantigen disease，dermatosisand diseasesareassociated gastro．enteritis，Kawasaki respiratory 20 ofsesandses-likewere the with todate，overtypes genesdiscovered，but SEs．Up researchaboutnovelSEswere remainedon detectionlevel．The of only gene purpose this wastorevealthe and ofseveralnovelSEs．