利用农杆菌介导幼穗法将水稻osdreb2.2基因导入小麦的研究.pdfVIP

摘要 盐碱、干旱、低温等非生物逆境胁迫严重影响植物的生长发育，是造成农作物减 产的直接原因。逆境响应转录因子的表达能够产生与顺式元件及其它相关蛋白之间的 相互作用，可激活或抑制下游一系列抗逆功能基因的转录，从而提高植物的综合抗逆 性，在抗逆转基因育种中具有重要功能价值。植物中AP2家族的DREB类转录因子 基因是近年来抗逆分子育种研究的热点，该类基因对提高植物的综合抗逆性具有重要 科学意义和应用价值。 小麦是世界上重要的粮食作物，目前小麦新品种的培育依然主要靠常规育种。虽 然近几年已逐步取得了一些可喜进展，但相对于玉米、水稻等其他禾本科作物，其转 基因研究进展仍然比较缓慢。利用现代基因工程技术进行小麦的品种改良是当前小麦 育种的一个新方向。它可以打破生殖隔离，使得不同物种间遗传交流成为可能，为拓 宽植物可利用基因库创造条件，弥补了常规杂交育种的不足，加速了作物遗传育种的 发展。 本研究以实验室和大田中处于开花期的小麦品种‘周麦16’和‘冀麦38’幼穗为材 料，尝试了以农杆菌介导的幼穗侵染法向小麦转化水稻AP2家族OsDREB2．2基因的 研究。所用载体为CaMV35S启动子驱动的无报告基因的的植物表达载体 PCR技术验证 了在T1代获得了转基因植株，经过对T1代106株共1059个籽粒结果统计表明，农 杆菌介导的幼穗法平均转化率达到了34．8吻，其中，不同的农杆菌菌株对不同的小麦 品种表现出不同的转化效率。在此基础上提取了他代植株8个家系28个植株的总 基因的表达，其中有23个株系为高的转录水平表达。这表明转化的OsDREB2．2基因 已经成功遗传到第，112代，并在转录水平上实现了稳定的表达。通过20％PEG和 250mMNaCI处理，验证了小麦植株过表达水稻OsDREB2．2基因显著提高了幼苗的 抗旱能力，部分植系显示了高的抗盐能力。本研究提供了一种适合小麦遗传转化的新 方法，为解决目前小麦转基因，特别是整株水平的转化，存在的低转化效率提供了一 种快速、简便、高效的解决方法，为促进转基因技术的不断提高和在小麦品种改良中 的应用奠定的基础。目前关于转化基因拷贝数的鉴定工作正在实验中。 关键词：农杆菌；幼穗；OsDREB2．2基因；小麦转基因 StudiesonRice via 0虹硒泡：配2GeneTransformationofⅥ恤eatthe FloralMethod Agrobacterium-mediated Dip wei Author：Wang Geneticsand Major：Crop Breeding Supervisor：YangxuejuProfessor AssociateProfessor Langminglin Abstract Abioticstressessuchas and could severe salt，drought，coldfreezingproducedamages on and of arealsothedirectreasonsof lOSSof growth developmentplants．which yield of were at level，and crops．Inplant