具有共生作用乳菌与酵母菌培养基优化及促生物质的分离.pdfVIP

摘 要 以内蒙古锡盟地区酸马奶中分离出来的能够通过交互添加代谢产物而相互促 进生长的一株乳酸菌LC5 和一株酵母菌YE4 为研究菌株，进行菌种培养基优化及 酵母菌YE4 代谢产物中能够促进乳酸菌LC5 生长的促生物质产生动力学研究，并 且对促生物质进行初步分离。 通过对乳酸菌和酵母菌各自五种常用的培养基进行筛选，选出适合酵母菌YE4 生长的YPD 培养基和乳酸菌LC5 生长的M17 培养基作为各自的基础培养基。基础 培养基成分的优化采用单因素试验和正交试验，获得YPD 和M17 的改良配方，对 优化前后培养基对比发现：改良YPD 培养基中酵母菌YE4 的OD 值为 1.952，是 基础培养基的 1.06 倍；活菌数比基础培养基 YPD 高一个数量级，可达到 8 5.01×10 cfu/ml，且二者之间差异显著（P0.05 ）。因此，YPD 培养基的改良效果是 明显的。同样，改良M17 培养基中乳酸菌LC5 的OD 值可达到1.537，是基础培养 8 基的 1.22 倍；活菌数为9.2×10 cfu/ml 是基础培养基M17 的5.97 倍；且M17 较改 良M17 培养基的pH 值低。因此，M17 培养基的改良效果也是显著的（P0.05 ）。 对酵母菌YE4 代谢产物产生的动力学研究发现，酵母菌YE4 在60h 时所产的 代谢物对乳酸菌LC5 的促进作用最好，因此，酵母菌YE4 代谢产物的制备条件为 30℃振荡培养60±2h。且代谢产物的添加量为40%时对乳酸菌LC5 的促进作用效果 最好。 通过对酵母菌 YE4 代谢产物的超滤发现代谢产物中分子量为 10KDM30KD 的物质对乳酸菌 LC5 的促进作用最佳，因此，把该分子量的物质称为酵母菌YE4 对乳酸菌 LC5 生长的促生物质。促生物质在波长为 190-700nm 的紫外分光光度计 扫描发现，其在243nm 和 301nm 时出现两个吸收峰，故将该物质初步的认为是蛋 白或肽类物质的混合物。经过80%硫酸铵沉淀促生物质，再依次经 Sephadex G-75 和Sephadex G-50 凝胶柱层析，分离得到对乳酸菌LC5 有促进作用的物质。该物质 电泳后呈现六条条带，其中一条分子量小于 14.4KD，其它几条分子量分别约为 15.2KD、17.6KD、19.1KD、21.3KD 和 23.8KD 。 关键字：共生作用；乳酸菌LC5 ；酵母菌YE4 ；培养基优化；促生物质；分离 Optimization Medium of Symbiotic Lactic Acid Bacteria and Yeasts and the Separation of the Promote Biomass Abstract The strains of lactic acid bacteria LC5 and yeast YE4, which were separated from koumiss in the Xilingol league of Inner Mongolia, were promoted each other to grow by adding metabolites interactively. The main studies were the optimization of culture mediums of strains ； the kinetic studies and separation of growth-promoting substances. Through adding the substances of yeast YE4, can promote the growth of lactic acid bacteria LC5. Screening