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利用茶叶梗固态发酵单宁酶及其酶制剂的制备 摘 要 单宁酶(Tannase，EC3．1．1．20)全称单宁酯酰水解酶，可以水解没食子酸单宁中的酯键和 缩酚羧键，生成没食子酸和葡萄糖。单宁酶具有处理茶汤“冷后浑”、制备没食子酸酯类 和改善皮革质量的用途，因此广泛应用于食品、饮料、医药和化工行业。单宁酶是一种诱 导酶，可在单宁的诱导下由微生物发酵产生。茶叶梗作为一种农业副产物，不仅营养物质 丰富还含有18—36％的单宁，因此，可用茶叶梗作为一种基础培养基发酵生产单宁酶。 本实验以黑曲霉JMU．TS528为菌株利用茶叶梗固态发酵产单宁酶，对固态发酵条件 及其酶制剂的制备工艺进行了研究。通过研究，阐明了各发酵条件对黑曲霉JMU．TS528 利用茶叶梗固态发酵产单宁酶的影响，建立了单宁酶固体酶制剂制备的工艺流程并优化了 过程参数，探讨了单宁酶制剂储藏稳定性的影响因素，为规模化工业生产单宁酶制剂及单 宁酶的广泛应用奠定了基础。 首先，采用单因素实验与响应面优化相结合的方法，对利用茶叶梗固态发酵生产单宁 酶的工艺进行了优化，得到黑曲霉利用茶叶梗固态发酵产单宁酶的最佳参数条件为：盐溶 6．06，液固比为1．8(v／w)，培养温度28℃，接种量2 液pH 的NH4Cl作为氮源，5％(W／v)的0【．乳糖作为外加碳源，250mL三角瓶装量5 g，培养时间 96 h。在优化的条件下进行单宁酶的固态发酵，酶活达到62 U／gds，是优化前的5．17倍。 其次，对固体酶制剂的制备工艺进行研究。利用缓冲液对发酵后的培养基进行浸提， 得到的粗酶液经过滤、脱色、除菌、超滤浓缩和喷雾干燥后，即可得到单宁酶固体酶制剂。 对酶制剂制备的喷雾干燥工艺进行优化，最佳参数条件为：助干剂为麦芽糊精、进风温度 96℃、进料速度182mL／h、固形物含量8％，在此条件下，最大单宁酶回收率达到79．8％。 根据以上工艺步骤和优化的工艺参数进行单宁酶固体酶制剂的制备，得到的单宁酶固体酶 制剂酶活力达到690 U／g，总回收率为77．2％。 最后，对制备得到的单宁酶固体酶制剂的储藏稳定性进行考察，结果表明温度、空气 和湿度对单宁酶固体酶制剂的储藏稳定性影响较大，光照对其影响不明显。在-20。C、真空、 避光条件下保存90d后酶活保留率可达98．9％，酶制剂在储藏过程中表现出良好的稳定性。 利用农业副产物茶叶梗固态发酵生产单宁酶，开辟了茶叶梗废弃资源再利用的新道 路，从可持续发展的角度看，这一生产过程既能减少环境污染又具备经济效益。 关键词黑曲霉，单宁酶，茶叶梗，固态发酵，酶制剂，储藏稳定性 Tannase Production under Solid．．State Tea Stalksand Using the of Study Enzyme Abstract Tannase breaks the ester specifically galloylbondoftanninsand gallicacid produce and canbeused glucose·The todealwith enzyme of and