力生长因子参与关节软骨原位再生修复的实验研究.pdfVIP

An Experimental Studyof Participation of Mechano Growth Factors in Situ Articular cartilage Regeneration in Rabbit Model A Thesis Submitted to ChongqingUniversity in Partial Fulfillment of the Requirement for the Doctor’s Degree of Biomedical Engineering By Luo Ziwei Supervised by Prof. Yang Li Specialty:Biomedical Engineering College of Bioengineering of ChongqingUniversity, Chongqing, China April 2015 中文摘要 摘 要 关节软骨（Articular cartilage ）在关节挤压和摩擦活动中具有润滑、减缓疼痛 功能，在维持关节稳定和人类日常活动过程中具有非常重要的作用。但关节软骨 没有血管和神经支配，缺损后不能自我修复愈合，会引发软骨纤维化、关节炎等 疾病，给患者带来极大痛苦。目前常用的治疗软骨疾病的方法包括自体软骨细胞 移植和骨髓刺激手术疗法，这两种方法的根本目的都是希望关节软骨再生，但实 际效果一般，并不能从根本上解决软骨修复的难题。其中自体细胞移植由于体外 软骨细胞扩增困难等条件限制已很难开展手术治疗，而骨髓刺激手术则由于血块 凝结、骨髓干细胞稀少等因素，令软骨修复过程容易引发纤维化，修复效果实则 难以令人满意。本文研究发现，力生长因子（Mechano growth factor, MGF ），作为 胰岛素样生长因子-1 （Insulin growth factor-1, IGF-1）的一个同源异构体，具有促 进转化生长因子β3 （Transforming growth factor β3, TGF-β3 ）诱导的骨髓间充质干 细胞（BMSCs ）软骨分化能力，同时还具有抑制BMSCs 软骨分化过程中纤维化的 发生。另外，MGF 还能促进BMSCs 的迁移能力。当借助于丝素材料作为携带MGF 和TGF-β3 的载体 （STM ）进入兔皮下组织时，通过细胞分离、免疫荧光和流式细 胞术鉴定，结果表明7 天内MGF 可以招募更多的MSCs 迁移至支架表面和内部， 2 个月时 Safrain O 染色证实 MGF 可以促进 MSCs 软骨分化和合成软骨基质， Masson`s 染色结果表明MGF 能减少肌纤维在胞外基质中的含量。而当用于关节软 骨缺损的修复模型时，仅丝素材料支架（SF ）处理的软骨表面无软骨基质和细胞 形成，材料组织融合性差。携带TGF-β3 的丝素支架（ST）可以促进部分软骨再生， 但在软骨表面仍会引起大量纤维化组织形成。STM 材料支架能促进关节软骨再生， 新生软骨的蛋白聚糖基质含量丰富软骨表面光滑平整，能表达正常的Ⅱ型胶原， 却没有Ⅰ型胶原表达，修复效果与正常软骨非常相似，表明STM 材料支架能显著 性提高关节软骨的再生修复能力。本文获得的结论主要有：①MGF 在体外具有显 著性促进 BMSCs 迁移的能力；②MGF 在体外可以显著性促进 TGF-β3 诱导的 BMSCs 软骨分化能力，并减少软骨分化过程中Ⅰ型胶原的合成；③STM 材料支 架在兔皮下可以招募多能干细胞（rMSCs ）迁移，长期时间内能促进软骨基质合成 和软骨分化，抑制皮下组织纤维化；④STM 支架在兔关节软骨缺损修复过程中具 有招募 MSCs 迁移的作用，长期时间内能促进关节软骨的再生修复，并抑制软骨 表面的纤维化发生，或许能为软骨缺损疾病治疗方法的改进提供新的理论支持。 关键词：力生长因子，干细胞招募，