剪切应力对hmcs迁移、向内皮细胞分化的影响及其力信号转导.pdfVIP

Effects of Shear Stress on Migration, Endothelial Differentiation of hMSCs and the Involved Mechanisms of Mechanotransduction A Thesis Submitted to Chongqing University in Partial Fulfillment of the Requirement for the Doctor ’s Degree of Engineering By Yuan Lin Supervised by Prof. Song Guanbin Assistant Supervised by Prof. Sato Masaaki Specialty: Biomedical Engineering College of Bioengineering of Chongqing University, Chongqing, China April 2013 中文摘要 摘 要 心血管疾病 (Cardiovascular Disease, CVD) 是一类涉及心脏、动脉、静脉、微 血管等循环系统的疾病。据2012 年世界卫生组织统计报告显示，CVD 致残、致死 率远远高于癌症和艾滋病，成为危害人类健康的一大疾病。因此开展CVD 的预防 和治疗具有重要意义。除了传统的中西药物治疗、血管成形术、冠状动脉旁路移 植术等机械疗法之外，再生医学领域中血管新生的治疗方案已逐渐成为世界生命 科学领域研究的热点课题。其中，寻求适当的细胞来源并诱导其定向迁移到组织 受损部位且有目的可控性的诱导其分化是目前血管再生医学所面临的重大挑战问 题之一。 间充质干细胞 (mesenchymal stem cells, MSCs) 是一类具有多分化潜能的成体 干细胞。由于其具有来源丰富、取材简单、增殖迅速、易于转染外源基因、低免 疫抗原反应、以及不涉及伦理问题等优点，成为组织工程、细胞治疗研究的重点。 目前已经有报道证明MSCs 具有归巢、迁移至组织受损部位并参与组织修复的特 性。在该过程中 MSCs 必然受到因血液、间隙流流动所产生的剪切力作用，然而 流体剪切力对MSCs 迁移、向内皮细胞 (endothelial cells, ECs) 分化的影响还少有 报道，其中所涉及的力信号转导途径及分子机理也尚未明确。 本文以人骨髓间充质干细胞 (human bone marrow-derived mesenchymal stem cells, hMSCs) 为研究对象，利用流体剪切力加载装置对hMSCs 施加不同水平的剪 切力作用。采用划痕愈合实验法，结合倒置显微镜和三电荷耦合器件 (three charge coupled device, 3CCD) 图像传感器实时观察和记录hMSCs 在流体作用下的迁移行 为，筛选促进 hMSCs 迁移的剪切力加载条件；通过免疫荧光染色 (immunofluorescence staining) 和蛋白质免疫印迹 (Western blotting) 方法检测促分 裂原活化蛋白激酶 (mitogen-activated protein kinases, MAPK) 家族中细胞外信号调节 激酶 (extracellular signal-regulated kinases 1/2, ERK1/2) 、c-Jun 氮-末端激酶 (c-Jun N-terminal kinases, JNK) 、p38 MAPK 以及 C-X-C 趋化因子 4 型受体 (C-X-C chemokine receptor