沼泽红假单胞菌活性紫KBR的脱色及其偶氮还原酶新基因片段的克隆与表达.pdfVIP

摘 要 胞在不同条件下对活性紫KBR的脱色效果。结果表明，该菌株生长细胞脱色的最佳条件为温 度25—30(2，pH7，厌氧条件下的脱色率远远高于好氧条件下的脱色率。染料作为该菌株唯 一的碳源和能源脱色时，脱色率与细胞浓度呈极显著相关，细菌脱色比活率保持在较恒定 的水平。此外，通过生长细胞脱色过程中对菌体生长的相应测定表明，该菌株生氏的指数期 明显滞后于染料脱色的指数期。我们又测定不同碳源时染辩的脱色过程，进一步证明这是 细菌出于自身的解毒功能先降解活性紫KBR，而后开始进入生长指数期。 脱色实验证明沼泽红假单胞菌(尉咖P面moⅫpalustris)对偶氨染料有较强的降解能 力，我们通过GenBank搜索，对所获得的所有偶氩还原酶基因在NCBI进行比对并设计引 物，从沼泽红假单胞菌质粒中扩增获得了一条含471bp完整开放阅读框架的序列。GenBank 搜索表明该基园为未登录的新基因。命名为PAR-I。通过互联网数据库及生物信息学分析 工具进行初步分析表明：该基因编码的蛋白是一种等电点为9．65的不稳定蛋白，定位于细 胞内膜：由a螺旋、延伸带、和随机卷曲三种形式组成，具有蛋白激酶C磷酸化位点等多 个位点，并具有一个强跨膜疏水区。将已该基因构建到融合蛋白表达载体pGEX-4T-1．通 过IPTG诱导，进行原核蛋白表达，SDS．PAGE电泳显示，有约48KD融合蛋白表达。对经 诱导的大肠杆菌BL21(DE3)进行偶氨染料脱色试验，检测到轻微脱色活性。 关键词：沼泽红假单胞菌；脱色；活性紫KBR；偶氮还原酶；生物信息学：融 合表达 Abstrct strainunder tamed N different of Thedecolorization palustris activity Rhodopseudomonas WaS showedthm studied．Theresuas circumstanceconditions outer 25-3073，pH7，0， temperature Were fordecolorization，WhenreactivevioletKBR andilluminatedconditions anaerobic optimum of as ofcarbonand ofN decolorizztionrate wasdecolorizedsolesource energy strain，the the violetKBRWaS correlativetocell decolorization reactive significantly concentration，however was cell ofNstrainsnotaffected concentration．In markedly addition，the activity