应用反转录聚合酶链反应测定病料中的猪瘟病毒.pdfVIP

摘 要 本试验建立了用反转录一聚合酶链反应(reverse transcriptiOil chain —polymerase 试 reaction，RT——PCR)技术检查猪瘟病毒， 验中参考国内外资料，合成二对猪瘟病毒核酸引物HCV一1和HCV一2， HCV—Al和HCV—A2，利用这二对引物均能对兔化弱毒中国株、法国株、 石门系强毒株的核酸进行扩增。 反转录RNA合成猪瘟病毒cDNAB,寸，变性温度65℃，感作温度42℃， 终止温度95℃。在PCR扩增时，变性温度95℃，时间60秒为最好。Taq 酶量135单位，30一35个循环，效果最佳。 。，正式试验将来自博白县三个猪场，贵港市西江的一个猪场和武宣 经夏 县一个猪场，共采集的13t9材料(肾、淋巴结)提取病毒RAN， 转录合成eDNA，然后分别加入二对猪瘟病毒核酸特异性引物(HCV一1和 县、贵港市西江的11份材料分别在478bp或508bp处，出现明显核酸带， 证明这些病猪为猪瘟。其中有三份材料经做兔体交叉试验为阳性，与 PCR的结果相一致。而采用武宣县的二份材料，均未扩增到猪瘟病毒 的核酸，但用合成的一对牛病毒性腹泻病毒核酸特异的引物在400bp 处出现核酸带，证明武宣县的该猪场发生的猪繁殖障碍是由牛腹泻病 毒引起的。J 关键词：猪瘟病毒，反转录，聚合酶连反应 -^L．．L 刖 昂 cholera 猪瘟病毒(Hog virub，HCV)是引起猪发生猪瘟的病原体。 猪瘟是一种猪的急性烈性传染病，是目前造成猪群死亡的最主要传染 病，国际兽医局(OIE)规定为动物传染病A类16种法定传染病之一。 猪瘟在中国广西各地区的猪场常有发生，造成养猪业重大损失。 虽然在中国广西广泛使用优良的”c”株猪瘟兔化弱毒疫苗， 但仍然不 能控制猪瘟发生。 有二十 猪瘟病毒属单股RNA病毒，病毒粒子的直径为34—50nm， 面体对称核衣壳，内部核心直径为30hm，具有脂蛋白囊膜。本病毒以 前属披膜病毒科，但近来根据HCV的复制类型和基因排列，将其归属 在此属内还有牛病毒性腹泻病毒 于黄病毒科瘟病毒属(1，2)， diarrhea viral (Boyiile disease virus，BDV)，此三种病毒的核酸有较高的同源性(3．4)。 HCV 测定了HCVBresia株的核酸序列，表明整个病毒染色体含有12283个 核苷酸。在Bresia株的核酸序列中，11694个核苷酸构成一个大的开 readingframe)，编码3898个氨基酸残基。用特异 放阅读框架(open 性猪瘟病毒抗体，在HCV感染细胞中鉴定出三种不同的糖蛋白，即 要组成成分(9)。猪瘟病毒目前来说只有一个赢清型，但毒株之间毒 力则有不同程度的差异。应用交叉中和试验把ttCV分为二个血清群， 即H(I)和B(II)，H群不易被牛病毒性腹泻病毒中和，似强毒株，B群 易被BVDV中和，似弱毒株，但发现其抗原性与毒力无明显的相关性。 猪瘟在世界上除了少数几个国家消灭以外，而大多数国家，尤其 是第三世界国家仍然存在，仍是危害养猪业的重要传染病之～。在中 国猪瘟仍是给养猪业造成重大损失的疫病 虽然用”C”株兔化弱毒苗 有效降低猪的易感性，控制了猪瘟发生，但近年来除发生急性、亚急 性、慢性猪瘟外，还发生了母猪繁殖障碍型及亚临床感染(10，11)， 给临床诊断带来困难。在猪瘟诊断中，往往借助于血清学的方法进行， 如最初的猪体保护试