巴马香猪药物代谢CYP450新基因克隆的分析.pdfVIP

摘要 巴马香猪药物代谢CYP450新基因克隆研究 动物学专业硕士研究生王世春 指导教师魏泓教授 ． 。 摘要 1研究目的及意义 细胞色素P450参与药物在肝内降解的第1相反应。据估计60％普通处方药需要 通过细胞色素P450系统进行生物转化。肝脏微粒体的细胞色素P450酶系统是促进药 物生物转化的主要酶系统，故又称肝药酶。其CYPl、2、3家族是参与药物代谢的主 要酶系。猪作为一种具有重要应用前景的药物评价动物及医学生物学实验动物，．其 功能基因。公开数据库中海量增长的序列信息为我们发现新基因提供了充足的资源。 ofeDNA 基于EST作为基因的部分eDNA序列，利用RACE(RapidAmplifieationEnds) 技术发现和克隆新基因已成为获取新基因和进行功能研究的重要途径。研究已表明小 型猪的P450系统和人具有类似的含量和活性，将其作为药物代谢模型具有一定的可 行性。但是，其各单酶的代谢特性研究还相当缺乏，获得其基因及编码区序列是研究 其单酶代谢特性的基础条件。为研究小型猪的药物代谢特性，和将其作为药物代谢实 验动物模型的可行性提供资料和依据，本研究以我国资源小型猪品系巴马香猪肝脏为 证，根据验证结果进一步利用RACE技术克隆并鉴定其全长eDNA序列，对得到的序 列进行生物信息学分析，同时与人和其他动物进行对比研究。 2研究内容和结果 2．1研究内容 2．1．1 CYP2R1、CYP2C91、CYPlA2全长eDNA序列。 并预测其结构和功能，同时与人及其他动物的序列进行对比研究。 西南大学硕士学何论文 2．2研究结果 2．2．1基因克隆结果 2．2．1．1 CYP3A88克隆结果 次，成功克隆并鉴定了CYP3A88全长eDNA序列，长度为1,999bp，其中编码区长 子质量为57．243 它们三者为同一基因。 2．2．1．2 G玢)2R1克隆结果 克隆并鉴定了其全长cDNA，并获得两个转录本，一个大小为2，005bp，其中编码区 分子量为56．996kD，一个经外显子遗漏剪接后全长为1,675 bp， bp，编码区长为1，176 编码391个氨基酸。 2．2．1．3CYP2C91克隆结果 RACE 的3’端序列。 2．2．1．4 CyPlA2克隆结果 端序列。 2．2．2序列分析结果 2．2．2．1 C冲3A88序列分析结果 Ⅱ 摘要 相似性高达94％，而与人等其它动物的C脚A相似性则在86％以下；推导和分析氨 段，由内向外的区域分别在175～191，213-233，295～314，383-401aa处，由外向内 的区域分别在7,--28，430,--457aa处；对其二级结构预测，它可能含12个Q螺旋，4 3A亚家 族保守结构区域；经聚类分析，小型猪和狗的CYP3A与人有较近的进化关系；通过 同源建模法对其在线建模，人CYP3A4晶体结构作为其模建模型，得到了其经典的三 维结构；电子表达谱分析表明：每100万个转录产物中，C册A88在猪的各个器官 达。 2．2．2．2CYP2R1序列分析结果 94％，与小鼠相比，其相似性为88％；经跨膜区域预测，共有7个跨膜区段，由内 314--336，456--473 向外的区域分别在38～61，179～197，223-241， aa处，由外向内 的区域分别在9~27，363-383aa处；对其二级结构预测，主要是Q螺旋(46．31％)， CDD程序分析可知，其49～501氨基酸区域为P4503A亚家族保守结构区域，剪接本 也存在相应保守结构区域；经