土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课件创新.pptVIP

3、本实验所需培养基： 常见的选择培养基 讲完第1点后讲课本P22中间楷体字内容引出2、3、4、内容 讲完后讲P23楷体字部分 尿素分子的立体结构 （一）筛选菌株 PCR技术需要耐高温的DNA聚合酶→ 泉发现耐热细菌→ 分离出耐高温的DNA聚合酶 原因：因为热泉温度70～800C，淘汰了绝 大多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。 1、自然界筛选菌株的原理： 启示：寻找目的菌种时要根据它对生存 环境的要求，到相应的环境中去寻找。 2、实验室中微生物的筛选原理： 人为提供有利于目的菌株生长的条件 (包括营养、温度、pH等)，同时抑制 或阻止其他微生物生长。 15.0g 琼脂 1.0g 尿素 10.0g 葡萄糖 0.2g MgSO4`7H2O 2.1g NaH2PO4 1.4g KH2PO4 特点： 1）固体培养基 2）碳源： 氮源： 其中尿素为唯一氮源 葡萄糖 尿素 培养基选择尿素为唯一氮源原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。 4、选择培养基 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。目的是从众多微生物中分离出所需要的微生物. 方法：要分离一种微生物，必须根据该微生物的 特点，包括营养、生理、生长条件等； ⑴抑制大多数微生物的生长 ⑵促进目的菌株的生长 结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通 过平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。 加入青霉素 分离出酵母菌和霉菌。 加入高浓度的食盐溶液 可得到金黄色葡萄球菌 缺乏氮源 分离固氮微生物， 缺乏有机物 分离出自养微生物。 5、怎样证明此培养基具有选择性呢？ 以尿素为 唯一氮源 的培养基 牛肉膏蛋白胨培养基 ?是 分离尿素细菌 判断该 培养基 有无选 择性 实验组 对照组 培养基类型 是否 接种 目的 ?结果 只生长尿素细菌 生长多种微生物 是 ㈡.统计菌落数目： 活菌计数法---稀释涂布平板法 (间接计数法） 显微镜直接计数---血球板计数法 1.活菌计数法（间接计数法） ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。 ⑵常用方法：稀释涂布平板法 每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。 说明设置重复组的重要性。第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。这个实例启示学生，在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。 计算公式： 每克样品中的菌株数 =（C÷V）×M 某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得 平板上菌落数的平均数为234，那么每克样 品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液 的体积为0.1ml） ( ) A. 2.34×108 B. 2.34×109 C. 234 D. 23.4 B 注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数； ②同一稀释度至少涂布三个平板作为重复组，然后求平均数； ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 2、显微镜直接计数： 利用血球计数板(血细胞计数板），在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； 缺点： 说明设置重复组的重要性。第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。这个实例启示学生，在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。 （二）设置对照 一是由于土样不同，二是由于培养基污染或操作失误。究竟是哪个原因，可以通过实验来证明