两个棉花cms选基因orf160和orf162的表达差异分析.pdf

本文是国家863项目 “超级棉花新品种培育的部分研究成果 (项目编号：2013AAl02601-2) 课题主持人： 张锐 研究员 中国农业科学院生物技术研究所 万方数据 摘要 Male 细胞质雄性不育(CytoplasmicSterility，CMS)是由细胞质基因控制的并可被核 恢复基因抑制的母性遗传性状，研究表明，这与线粒体异常有关。线粒体基因在能量代 谢中起关键的作用，其编码的蛋白质主要是氧化呼吸链的结构蛋白和生物合成蛋白。虽 然CMS在生产杂交种子中有着举足轻重的作用，但关于CMS产生的机理仍然不清楚。 目前，在多种植物中发现了与细胞质雄性不育相关的线粒体基因或orfs；相较于其他的 作物，有关棉花的细胞质雄性不育机理的研究还很少。目前的报道显示，off／60和。印62 这两个插入棉花线粒体中的orf基因是棉花CMS的候选基因。 D斫过表达该基因的拟南芥和烟草，表现出部分或完全不育，因而被认为是一个棉花 料进行分析后，克隆了不育胞质和可育胞质之间的差异基因D棚卯。 为了进一步深入了解这两个棉花CMS不育候选基因在不同种类的不育胞质当中的 情况，以及分析104．7A中这个两个CMS候选基因在不育胞质和可育胞质当中是否存在 转录上的表达差异，我们做了如下实验来分析： 棉花不育系当中的存在情况。通过扩增D椰60和D印62这两个不育候选基因，我们发 现，在被调查的CMS系中这两个候选基因均仅存在于不育胞质当中，在可育胞质中无 法获得扩增结果。这表明这两个不育候选基因是不育胞质特有的，另外，本文分析了 状况以及表达情况，从分析结果显示，在104．7A品系当中，DJ=，：『60基因的边缘序列有 异于其他的被调查的CMS系材料，这值得进一步研究分析。 2．通过RT-PCR分析这些被调查的CMS材料中这两个候选基因的表达情况，结果 显示，在这些材料当中，orfl60和orfl62这两个基因都是转录的。 万方数据 3．进一步通过Northern 它与功能基因之间的转录关系。观察结果显示，orfl60这个不育候选基因是单独转录的。 与它相近的功能基因atp4在不育与可育胞质之间差异不大，但orfl60在不育胞质与可 育胞质之间是存在差异的，在不育胞质中获得了转录本，而可育胞质中无转录本。这说 明了orfl60这个不育候选基因与不育性状存在一定的相关性，但棉花CMS的恢复是发 生在转录后水平，这还有待于进一步的研究来证实。 关键词：棉花：基因组DNA；线粒体基因；细胞质雄性不育；offl60；D∥62 II 万方数据 ofDifferential ofTwoCottonCMSCandidate Analysis Expression Genes60and 62 orfl orfl Abstract male a andnuclearrestorer genes Cytoplasmicsterility(CMS)controllebycytoplasmic was maternal thatthemitochondrialabnormalities． gene suppressedgenetictraits，showing Mitochondrialmetabolisminits roleinitsencoded is energy genes key proteinmai