福建尤溪金柑rpd分析及柑桔类种质资源的离体保存研究.pdf

摘要 植物，是具有重要经济价值的热带水果。我国是世界柑桔起源中心之一，且有4000年的栽培 历史。经过数千年的进化发展，形成了种类繁多、形态复杂而又丰富的柑桔种质资源。福建 柑桔种质资源非常丰富，其中国家地理标识产品尤溪金柑，已有370多年的栽培历史，长期 以来一直实生繁殖，变异大，资源丰富。鉴于此，本试验首先采用RAPD分子标记对尤溪金 柑进行遗传多样性分析，进一步对尤溪金柑资源及福建的主要柑桔种质资源进行离体保存研 究，并克隆了早熟金柑试管苗的Mn-SOD基因，为研究柑桔试管苗保存过程中SOD的作用 机制奠定基础。主要研究结果如下： 1．福建尤溪金柑遗传多样性的RAPD分析 本试验采集了122份尤溪金柑的叶片，这122份金柑中包括本实验室与尤溪县良种繁育 场合作研究筛选出的20个优株单株及其周围对照株5株(编号为1．120号)；另外还有两个 母株优株编号分别为121和122号。对这122份金柑资源进行RAPD遗传多样性分析。结果 显示，供试材料两两间的相似系数较高，平均高达0．947。这说明供试的122份金柑资源亲缘 关系较近。 所有材料在I(Dl--13．5)处可以明显的划分为2组，第一组含有102个单株，第二组含 有20个单株。第二组在II(D2=10．5)处又可分为两个亚组，第一亚组包括19个单株(在Ⅲ (D3=8．5)处可分为两小组，第一小组包括3个单株，第-d,组包括16个单株)；第二亚组 只分出一个母株。第一组在IV(D4=4．5)处又可以分为四个小组，第一小组有94个单株，第 二和三小组各有两个单株，第四小组包含6个单株。 在Dl-13．5处划分的第2组中的20个单株均为早熟株系，可知本试验中所选引物可以清 楚的区分出金柑的早熟和非早熟性状。在D2=10．5处又可把早熟金柑划分为滑皮和非滑皮两 种。 总体来看，周围的五株与其母株对比均有大小不等的变异。与周围五株基本无差异的母 株编号为97号、9l号、1号、49号。与周围五株有微小差异的母株编号为55号、61号、67 号、85号、37号、43号、31号和7号。与周围五株有差异较大的母株编号为103号、19号、 13号、25号、109号、115号和79号。差异最大的为73号和周围五株。 尤溪金柑的遗传多样性是其种质资源多样性的基础，这点充分说明了尤溪金柑的育种潜 力巨大。 2．柑桔类种质资源试管苗的离体保存研究 以柑桔珠心胚为主试材料，接种在未添加任何激素的MS培养基上，光照强度1000Lx， 温度2511℃，光照时间12h／d。详细观察了16种不同材料的生长情况，观察了28份柑桔离 体保存试管苗的保存情况。 16种试管苗材料在18个月的保存过程中，对于叶片，芦柑从1个月到18个月的叶片数 III 目始终最多；胡柚的叶片数目最少，但是由于苏柑在保存lO个月后，叶片有脱落的现象，使 得苏柑在保存到第12个月时及之后成为叶片数目最少的一种。总体来看，芦柑、桔类、瓯柑 的叶片比较多，金柑类和胡柚的叶片较少。对于主根长，沙糖桔在保存过程中，主根始终最 长，芦柑的主根长仅次于沙糖桔；其余各材料在不同阶段根的生长速度有所波动；早熟金柑 2号在保存2个月到18个月的时间里主根长度始终最短。总体看，金柑类的主根长度相比其 他材料的短。 从l8个月存活率分析，试管苗的叶片数目与主根长度似乎与存活率没有因果关系。保存 最好的为早熟金柑l号、早熟金柑2号和胡柚，18个月的存活率分别为58．3％、61．6％、57．6％， 其中苏柑的存活率最差，在15个月时存活率仅为11．9％，18个月时仅为9．8％，看来MS培 养基不适合苏柑的保存。 很多柑桔品种都能在MS培养基中、不转接不继代的条件下保存很长的时间。如保存至 今的广东阳春桔、福州血橙、福桔、重庆红桔这4种材料的保存时间长达51个月，其次为四 季桔50个月，福寿桔49个月，而且这些柑桔试管苗仍有继续保存下去的可能。 3．早熟金柑试管苗Mn-SOD基因克隆 以常温离体保存的早熟金柑试管苗幼嫩叶片为材料，获得早熟金柑试管苗Mn-SOD基因 该Mn-SOD 不同物种间Mn-SOD基因同源性比较，同源性都比较高。其开放阅读框(Ol强)共有684个 碱基组成，编码228个氨基酸，ATG为起始密码子、T从为终止密码子。 蛋白理化性质预测结果显示：早熟金柑试管苗^锄．SDD蛋白的分子量是25159．7Da；理 (7．5％)、17(