茶花的安全性评及茶黄素和茶籽黄酮苷对呼吸链酶作用机理的研究.pdf

摘要 摘要 茶花和茶籽包含许多功能成分，在食品、饮料、化妆品等领域具有广阔的应 用前景。茶花具有多种生物功能，在中国民间用于除臭、护肤、化痰止咳。为了 茶树花相关产品的市场化，本研究对茶树花安全性进行了评价。急性毒性试验表 明茶树花提取物对试验动物无影响，LD，。12．09／kgBW，属实际无毒级。Ames试 验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验结果都表明供试样品无 致突变作用。90天喂养试验证明茶树花提取物对大鼠体重、食物利用率、血液 学，血生化、脏体比和病理组织均无显著影响，表明茶树花提取物在测试剂量范 围内是安全的。这为茶树花相关产品的研发和市场化奠定了基础。 茶黄素是红茶中重要的多酚类物质，具有抗氧化、抗肿瘤等生物活性。本研 酸酯(EGCG)对大肠杆菌呼吸链复合体I，NDH-2和ATP合成酶具有抑制作用． 所有供试样品能够抑制复合体I和NDH一2的NADH氧化酶活性．TF3活性最强， 是复合体I的竞争性抑制剂，NDH-2的反竞争性抑制剂。此外，TF3能够抑制复 合体INADH-HAR还原酶活性，且为其反竞争性抑制剂。这表明TF3在复合体I 土不止有一个结合位点。TF3能够显著抑制复合体I、NDH-2和活体细胞的超氧 化物产生，但这与其对酶的抑制作用无关。 四种茶黄素单体和EGCG能够不同程度的抑制大肠杆菌ATP的水解，这在细 胞膜和纯化的F。中都得到证实．相对于EGCG而言，茶黄素抑制质子跨膜传递的 能力更强。 利用分子对接技术对茶黄素四单体和EGCG进行在线虚拟筛选，发现了许多 新的潜在靶标蛋白，这对指导未来的茶叶功能成分研究具有重要意义。 本研究采用超临界提取和LC-MS技术成功提取并鉴定了茶籽饼中两种山奈 酚黄酮苷，并对二者与对大肠杆菌复合体I和ATP合酶的互作进行了初步探讨。 研究表明萃取时间、压力、温度和夹带剂乙醇浓度都能够显著影响目标产物的得 50 率．最佳超临界提取工艺为萃取时间1 min，压力20MPa，温度80C，夹带 剂乙醇浓度60％。该条件下实际得率为1．4±0．4mg／g，与预测值II．9rag／g 无显著差异。两种化合物经LC-MS鉴定为山奈酚-3-0-【2-0-∥一D一吡喃半乳糖基 I 摘要 木糖基一6一O一口一L一吡喃鼠李糖基】一∥一D一吡喃葡萄糖苷。然而，两种化合物在较 高浓度时(1 00pM)对大肠杆菌复合体I和ATP合酶的活性均无影响，是否具有 其它生物功能有待进一步研究。 关键词：茶树花；安全性；茶黄素；复合体I；NDH-2；ATP合成酶；超氧化物； 分子对接；茶籽饼；超临界流体萃取；山奈酚黄酮苷 摘要 Abstract Teaseedsandteaflowerscontaina ofbioactive variety ingredients， andcanbeusedinthe offood．drinkandcosmetiC．Teaflowers production S functionsandhavebeenusedintraditional posSeSmanyphysiological medicinesfordeodorizat and ion，skincare，coughsuppressantexpectorant inChina．However．thelackofinformationaboutTea S ible flowers’pos toxiCirestrictS itS ication．The investionwascarried ty appl