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黄瓜耐冷生理变规律及相关基因转录组测序和表达分析
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目 录
摘要…………………………………………………………………………………………………．I
英文摘要…………………………………………………………………………………………．．III
1前言………………………………………………………………………………………………………………………………l
1．1研究的目的和意义…………………………………………………………………………．．1
1．2研究内容和技术路线…………………………………………………………………………2
1．2．1研究内容………………………………………………………………………………一2
1．2．2研究技术路线……………………………………．………………………………………3
1．3国内外研究动态与趋势……………………………………………………………………．3
1．3．1植物的表达系统和耐冷性……………………………………………………………一4
1．3．2植物耐冷基因的研究进展……………………………………………………………10
1．3．3转录组测序……………………………………………………………………………．12
1．B．4实时荧光定量PCR……………………………………………………………………14
1．3．5比较基因组学…………………………………………………………………………15
1．3．6
RNA干扰技术的研究进展……………………………………………………………．15
2材料与方法……………………………………………………………………………………．．19
2．1黄瓜自交系的收集及耐冷性鉴定…………………………………………………………19
2．1．1试验材料………………………………………………………………………………19
2．1．2试验方法………………………………………………………………………………．19
2-2不同黄瓜自交系低温处理后转录组文库制各……………………………………………2l
2．2．1试验材料………………………………………………………………………………21
2．2．2试验方法………………………………………………………………………………．22
2．3黄瓜基因组中耐冷相关基因组织表达特异性分析………………………………………25
2．3．1试验材料………………………………………………………………………………．25
2．3．2处理方法………………………………………………………………………………25
2．3．3主要仪器设各…………………………………………………………………………25
2．3．4
PCR引物设计与合成…………………………………………………………………．26
2．3．5总RNA的提取…………………………………………………………………………26
2．3．6
cDNA链合成…………………………………………………………………………．．26
2．3．7反转录……………………………………………………………………………………26
2．3．8荧光定量PCR…………………………………………………………………………27
2．4利用RNAi验证候选基因在黄瓜耐冷中的功能…………………………………………28
2．4．1
dsRNA干扰载体的构建………………………………………………………………28
2．5数据统计分析………………………………………………………………………………28
3结果与分析…………………………………………………………
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