二倍体马铃薯青病抗性的分离及分子标记鉴定.pdfVIP

二倍体马铃薯青枯病抗性的分离及分子标记鉴定 摘要 青枯病是由茄科雷尔氏菌(Ralstonia 性土传病害，在热带、亚热带、部分温带、甚至一些冷凉地区普遍发生，寄主范围 涉及50多个科的200多种植物，其中包括很多重要的经济作物，如马铃薯、番 茄、花生和烟草。青枯病作为马铃薯的主要病害，目前生产上还没有有效的舫治措 施。化学药剂防治易造成环境污染和病原菌抗性小种突变，农业综合防治效果有 限，因此只有选育青桔病抗性品种才是最为经济、有效的途径。然而，迄今为止， 在马铃薯栽培种中尚未发现有效的青枯病抗源，仅在一些二倍体野生种和原始栽培 种中存在有青枯病抗性。其中原始栽培种Solanurnphureja表现出高度的青桔病抗 性，成为马铃薯抗青枯病育种的主要抗性来源。但由于青枯病抗性表现出复杂的寄 主、环境、病原小种的互作，因此对于青枯病抗性具体的遗传机制还不甚清楚。这 一方面降低了田间抗性鉴定的效率和准确性，另一方面阻碍了抗病品种选育的进 程。近年来，随着分子标记技术的出现和不断发展，标记辅助选择成为作物抗病育 种中的有力手段。通过筛选与抗性基因或性状紧密连锁的分子标记，在育种过程中 可以实现对抗性位点的直接基因型选择，避免了烦琐的罔间接种鉴定，加速了抗性 基因的渗入和聚合，大大提高了育种效率。另外，也为图位克隆抗病基因，进行目 的基因转化提供了基础。 vernei所 本试验旨在利用具有青枯病抗性的原始栽培种＆phureja及野生种S 枯菌接种鉴定，分析二倍体马铃薯青枯病抗性的遗传规律：并利用RAPD技术，结 合群分法(Bulked Analysis，BSA)策略，筛选与青桔病抗性紧密连锁的 Segregam 分子标记。主要实验结果如下： 】，通过青枯菌生理1号小种(生化小种3号)对两群体单株进行田间温室接种 鉴定，发现CE、ED两群体青枯病抗性的分离比例，经卡方测验均符合1：1，为 分析标记的共分离奠定了基础。 2．利用RAPD技术，结台群分法，从160个随机引物中筛选得到两个与青枯病 抗性连锁的标记OPA07446和OPAl 7 抗性位点的图谱距离为14．7cM，OPAl2980与青枯病抗性位点的图谱距离为24 cM。 cM。并且位于同一连锁群，为一对侧翼标记，两个标记之间连锁距离为39．4 cM，OPAl2980 对于CE群体，标记OPA07446与青枯病抗性位点的图谱距离为23．9 cM，但在CE群体中，没有检测到两标记间 与青枯病抗性位点的图谱距离为31．4 存在连锁。 4 3．对单标记与双标记选择准确性的比较发现，在ED群体中，标记OPA07。。。 的分子标记辅助选择策略。 4．通过对特异标记片段的回收、克隆及测序，设计SCAR引物，成功将RAPD 记在两个群体单株以及其它抗感株系中的分析表明与青枯病抗性连锁，提高了标记 的稳定性和实用性。 5．对特异标记片段的测序结果进行了BLAST同源佳比对，结果发现OPA07。。6 源，达88％(Pe。)，为进一步研究蛋白酶抑制荆I基因在马铃薯青桔病抗性中 的作用提供了依据和条件。 关键词：马铃薯青枯病群分法RAPDSCAR标记辅助选择 of resistance and identificationoflinked Segregation markersto bacterial wilt(Rolstonia