马铃薯晚疫病水抗性相关基因诱导表达谱及水平抗性机制初探.pdf

缩略词表 7 摘 要 tuberosum 马铃薯(Solanum L)是国际上第四大粮食作物。由致病疫霉菌 (Phytophthorainfestans)I起的晚疫病是世界农业生产中最具破坏性的植物病害之 一，在世界各地广为流行，晚疫病防治一直为国际社会所关注。由于水平抗性是由 微效多基因控制的非小种专化抗性，抗性较为持久、稳定，所以选育广谱、持久的 水平抗性品种已成为马铃薯晚疫病抗性育种的必然趋势．目前，研究人员已开展了 水平抗性相关的数量性状位点(QTL)的定位以及差异表达基因分离、鉴定等工作， 但这些基因在晚疫病菌侵染期间的动力学表达模式、参与的防卫代谢途径和调控机 制以及水平抗性信号传导网络尚不清楚．为此，本研究应用cDNA微阵列技术，综 合分析了1009条马铃薯晚疫病水平抗性相关的表达序列标签(ESTs)在晚疫病菌和 不同非生物因子处理下的动态表达模式，并比较了这-此ESTs在不同抗性马铃薯品种 (系)中的表达差异，旨在揭示晚疫病水平抗性的分子基础，为有效利用水平抗性 提供理论依据与技术策略。主要研究结果如下： (1)以水平抗性马铃薯品系(OR；CIPCode：386209．10)叶片为材料，全面 分析了1009条ESTs在晚疫病菌侵染过程中的动态表达模式。以每个样点在接种与 对照样品中的杂交信号比值2．2为标准，筛选出669个显著差异表达ESTs，经测 序、比对、合并重复类型后，共得到348个代表不同基因的非重复序列片段(Singleton EsD，其中234个与已知功能基因(或ESTs)具有显著序列相似性，而其它114个 类别，即细胞防御、初级代谢、次级代谢、能量代谢、信号传导、转录调控、蛋白· 质合成、蛋白质降解、细胞运输、细胞结构、结合功能蛋白，系统性反应和发育。 根据鉴定基因的病原诱导表达模式，可将马铃薯对晚疫病菌的防卫过程大致区分为 三个明显时期，从而在分子水平上初步揭示了晚疫病菌侵染马铃薯叶片的自然过程， 并预测了这些事件发生的时间顺序以及参与每个阶段的基因．这些基因的病原诱导 表达谱可作为马铃薯防御机制深入研究的重要平台，并可为确定晚疫病水平抗性候 选基因及其参与的防御路径、调控机制等研究提供线索。 (2)在上述348个晚疫病抗性相关基因中，包括98个代谢相关基因。根据这 些基因在晚疫病菌侵染后的动态表达模式，初步推断，共有11条代谢途径可被晚疫 病菌诱导激活，即莽草酸途径、苯丙烷类途径、氧合脂类途径、多胺合成与降解途 径、生物碱合成途径、乙烯(ET)合成途径、糖酵解途径、类异戊二烯途径、磷酸 戊糖途径、三羧酸循环和乙醛酸循环途径。这些代谢相关基因各自具有的特异性诱 导表达模式暗示了上述途径可能在相互联系、彼此协调的代谢网络中发挥作用，从 而共同参与了马铃薯抵御晚疫病菌侵染过程。位于上游的糖酵解和莽草酸途径对于 满足下游的三羧酸循环、类异戊二烯、生物碱合成和苯丙烷类等代谢途径所需的底 8 物供应是非常必要的．此外，·分别产生水杨酸(SA)、茉莉酸(JA)和ET的苯丙 烷类途径、氧合脂类途径和ET合成途径的激活表明三大防卫，胁迫信号分子可能介 导了马铃薯对晚疫病菌的防卫反应． 上述348个基因在不同处理下的动态表达模式可以判断，绝大部分晚疫病菌应答基 因也能被三种信号分子的一种或多种调控，意味着依赖于SA的系统获得抗性(SAR) 途径和依赖于JA／ET的诱导系统抗性(ISR)途径在马铃薯晚疫病水平抗性材料中 同时存在，并共同参与了马铃薯对晚疫病菌的抗性反应．根据明Ⅸy’ERF、MYC 等转录因子基因在SA、MJ和ETH处理下的不同诱导表达谱，初步推测，三大信号 途径可能在各自信号传导的下游实现整合，最终介导了马铃薯抵御晚疫病菌侵染的 协调统一的防卫反应。 (4)以OR叶片为实验材料，全面分析了上述348个基因在机械伤害和脱落酸 (ABA)处理下的动态表达变化。结果表明，这些基因中的绝大部分也能被机械伤 害诱导表达，说明植物防卫反应与伤害反应之间存在广泛的交叉互作。ABA处理也 能诱导大量晚疫病菌应答基因的上调表达，但在个别处理时间点上却又抑制了某些 基因转录，初步揭示ABA在植物抗病防御反应中可能具有双重调节作用．此外，在 所鉴定的348个基因中，绝大部分可被晚疫病菌、机械伤害和ABA共同诱导表达， 反