茶树分子遗传图构建及多酚氧化酶基因的snp研究.pdf

茶树分子遗传图谱构建及 多酚氧化酶基因的SNP研究 摘 要 茶树『Camellia 要经济作物，也是21世纪最流行的健康饮料植物。关于茶树分子标记技术及遗传多 样性在DNA分子水平上的研究，于20世纪90年代中期开始在国内外均作了一些开 创性的工作，但与其他重要经济作物相比，仍存在有较大的差距。相对应用较多的 于茶树是一种高度异质性的多年生异花授粉植物，也使茶树遗传图谱的构建十分困 关茶树的核苷酸序列信息相对较少，故限制了其在茶树遗传研究中的应用。从常规 的分子标记技术过渡到直接对D1qA碱基序列的多态性进行研究，是现代分子群体 遗传学发展的必然趋势，但到目前为止，用于基因突变检测和SNP分析的新技术， 大多局限于医学上的应用，而在农业上的应用研究还鲜见报道。 SSCP标记方法着手，并用这些标记技术研究优异茶树种质资源的遗传亲缘关系；同 时借鉴多年生果树及林木分子图谱构建时采用的“双假测交理论”(double pseudo． testcross 叶)构建茶树的分子标记连锁遗传图谱。本研究在第二部分对茶树多酚氧化酶 探讨SNP与茶树品种适制性及遗传背景的关联性。本文主要研究结果如下： 法、SDS区室法)进行改良后，经对比研究发现：4种方法均能提取高质量的 EcoR I酶切消化、也能获得清晰的PCR扩增图谱。并以鲜叶为对照，研究在一20 ℃、一70。C保存及硅胶脱水干燥法保存鲜叶样品对DNA提取质量的影响，结果表 明：用鲜叶和该几种方法保存的样品提取基因组DNA的效果完全相同，硅胶脱水 干燥法是一种较好的鲜叶保存方法，解决了茶树分子生物学研究远距离采样时样品 保存的难题。 2、采用银染法代替同位素标记法，建立了分辨率高、重复性好的茶树AFLP一银 染显色技术体系。根据所建立的AFLP一银染技术体系，对不同茶树品种的指纹图谱 进行了初步研究，结果发现，同一引物对不同品种扩增及不同引物对同一品种扩增 都呈现出十分丰富的多态性。因此，AFLP分析技术是一种揭示茶树遗传变异的十 分高效可靠的方法，非常适合于构建不同茶树品种的指纹图谱，为茶树品种保护、 种质鉴别、种子与苗木的纯度检测及真假辨别提供科学依据。 3、研究分子标记在作图群体中的分离状况是构建遗传图谱的基础。本研究借鉴 “双假测交理论”，以祁门4号×潮安大乌叶的Fl代群体为材料，对AFLP、RAPD 与ISSR标记在FI代群体的分离方式及分离比例进行研究，结果表明，3种标记在该 Fi代群体中呈现孟德尔分离、偏盂德尔分离及异常分离3种分离方式。在D=O．Ol水 孟德尔分离位点占分离位点总数的73．40％；在孟德尔分离位点中发生1：1分离的位 方式出现的频率分别为82．93％、14．63％和2．“％。 锁分析，分别构建了祁门4号与潮安大乌叶的AFLP分子标记连锁图谱，其中母本 图谱包括由208个标记组成17个连锁群，总图距为2457．7 cM，平均图距为11．9 cM。父本图谱包括由200个标记组成的16个连镆群，总图距为2545|3 cM，平均图 距为12．8 cM。本研究结果证实，AFLP标记是目前为止可用于茶树遗传图谱构建的 最高效的分子标记；所选用的Fl代群体是非常适合于构建遗传图谱的分离群体： “双假测交理论”对茶树分子遗传图谱的构建具有十分重要的推动作用。 标记的茶树分子图谱。母、父本分别包含9个连锁群，总图距分别为577．1cM和 550．3 cM，平均图距分别为19．9 cM与18．3 cM，所包含的标记数分别为30个与31 个。 Il 6、整合AFLP、ISSR、RAPD 3种标记数据并对其进行连锁分析，构建了国内 外第一张综合AFLP、RAPD与ISSR