茶树抗坏血酸过化物酶(apx)基因克隆及逆境胁迫下的表达特性与生理响应.pdf

于葡 要 抗坏血酸过氧化物酶(ascorbateAPX)最早发现于20世纪70年代， peroxidase 它是一种存在于高等植物和真核藻类中的亚铁血红素蛋白。近年来关于APx的研究 发展较快，特别是APx作为抗坏血酸一谷胱甘肽循环中的关键酶，能够清除植物叶 绿体、细胞质和微体中过氧化氢(H202)的作用已经引起了人们的广泛关注。APx 比其它抗氧化酶对H202有更高的亲和力，且叶绿体中尚未发现有清除Hz02的过氧化 氢酶(CAT)，因此，叶绿体中的H202主要是由APx清除的。所以，在逆境胁迫下， APx对于植物维持正常的光合能力具有重要的作用。 茶树原产于热带及亚热带地区，是一种喜温暖，湿润气候的的经济作物。而低温 和_T．旱等逆境胁迫一直是茶树分布和产量的限制性因素。因此，茶树抗寒性和抗早性 机制的研究也一直受到极大的关注。本研究从低温诱导茶树SSH文库和茶树全器官 转录组文库中分别筛选出1条4以的EST片段，以茶树叶片为试验材料，克隆得到 stromal 三个么以：微体型4以(Microbody4以)、叶绿体基质型爿以(Chloroplastic 4以)，并对它们初步的生物信 彳以)和类囊体爿以(Chloroplasticthylal(oid-bound 息学进行了预测和分析。通过RT．PCR和qRT—PCR分析研究了不同类型的彳麟在茶 树不同组织中以及自然越冬低温期和干旱胁迫下的表达差异，并对不同茶树品种的 APx活性及其叶绿素荧光参数进行了测定。主要研究内容和试验结果如下： 编码288个氨基酸，c一端具有定位于过氧化物酶体的跨膜结构；类囊体4麟，命名 C一端具有定位于类囊体的跨膜结构；叶绿体基质型彳以，命名为。鲥麟，cDNA全 2．多序列同源比对发现3个彳以都含有植物抗坏血酸过氧化物酶的2个保守功能 结构域：活性位点和亚铁血红素结合位点。此外，鲥以和组以也都含有叶绿体型 2 (K—N．I．E．E—W．P)和 (E—T—K—Y．T．K—D—G—P—G- 彳以的 个保守结构域： (GenBalll(登录号：EU547804)分属于两大类。 Q鲥以、o纠麟和西刎以在茶树不同组织中 3．利用RT—PCR对白，州Pk 的表达水平进行了研究。结果表明。洲以在根、茎和叶中分布均衡不具有组织特异 性，而o，础以、Q所蹦和。洲以具有组织特异性且丰要分布在叶片中。 4．以茶树品种“茶农98”、“迎霜”和“舒茶早”的一生年无性系茶苗为试验材料， 对其越冬低温期间APX活性、叶绿素荧光参数以及4种彳鲋的表达水平进行了研究。 结果表明，品种间的APx活性变化规律一致，先升后降，且均在1月份达到最大值； 月和1月显著上调，之后下降，而，刎以和纠麟上调程度较小。 5．干旱胁迫下，三个品种的APx活性变化规律一致，即随胁迫程度加重先下降 和所以表达水平受干旱胁迫影响程度较小，鲥麟在干旱胁迫诱导后显著上调表达， 而cAPX的表达却受到干旱胁迫抑制。 关键词：茶树，抗坏血酸过氧化物酶，基因克隆，半定量RT．PCR，qRT—PCR Abstract kindofheme in and Ascorate plants proteinsexistinghigher peroxidase(APX)，a APX in1970s．Inrecent researchesabout fo