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棉铃虫对bt毒cry1ac抗性的分子遗传机理研究
)
一
目 录
中文摘要…………………………………………………………………………………………..Ⅵ
英文摘要…………………………………………………………………………………………..Ⅶ
1.前言…………………………………………………………………………………………………………………………..1
1.1文献综述………………………………………………………………………………………l
1.1.1苏云金芽孢杆菌…………………………………………………………………………l
1.1.2转Bt基冈作物的研究与应用…………………………………………………………..7
1.I.3昆虫对Bt及转基因作物的抗性现状…………………………………………………..9
1.1.4昆虫对Bt抗性稳定性的研究…………………………………………………………ll
1.1.5昆虫对Bt抗性的遗传研究……………………………………………………………12
1.1.6昆虫对Bt抗性的分子遗传机制研究…………………………………………………14
1.1.7Bt抗性治理策略的研究………………………………………………………………一16
1.1.8
AFLP分子标记技术及其在昆虫学研究中的应用…………………………………….18
1.2本论文研究目的和意义……………………………………………………………………2l
2.材料与方法………………………………………………………………………………………23
2.1试验材料……………………………………………………………………………………23
2.1.1昆虫材料………………………………………………………………………………一23
2.1.2Bt毒素………………………………………………………………………………………………………………24
2.1.3主要实验仪器及试剂……………………………………………………………………24
2.1.4主要生化试剂及缓冲液配制…………………………………………………………….24
2.2试验方法……………………………………………………………………………………26
2.2.1棉铃虫抗Bt毒素CrylAc近等基因系的建立………………………………………..26
2.2.2棉铃虫对Bt毒素CrylAc的抗性遗传分析…………………………………………一28
2.2.3棉铃虫抗Bt
CrylAc毒素AFLP标记体系的建立……………………………………29
2.2.4变性聚丙烯酰胺凝胶电泳……………………………………………………………一32
2.2.5银染…………………………………………………………………………………………………………………33
2.2.6数据统计与分析………………………………………………………………………..33
2.2.7
AFLP标记的同收、克隆及序列特征…………………………………………………34
2.2.8棉铃虫对Bt毒素CrylAc抗性稳定性的初步监测…………………………………一34
3.结果与分析……………………………………………………………………………………..36
3.1棉铃虫抗Bt毒素CrylAc近等基冈系的建立…………………………………………….36
3.2棉铃虫对Bt毒素CrylAc抗性遗传分析…………………………………………………37
3.3.1基因组DNA含量及纯度测定…………………………………………………………38
3-3.2酶切.连接反应…………………………………………………………………………38
3.3.3连锁群的确定以及抗性相关检验……………………………………………………一39
3.3.4连锁图谱框架构建及定位抗性基因…………………………………………………一43
东北农业人学农学博Ij学位论文
3.3.5AFLP标记的同收、克隆及序列特征…………………………………………………44
3.3.6棉铃虫对Bt毒素CrylAc抗性稳定性的初步监测……………………………………46
4.讨{仑…………………………………………………………………………………………………………………………….48
4.1棉铃虫抗Bt近等基冈系的建立…………
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