猕猴桃种质资源apd分析及芽变scar标记研究.pdfVIP

摘要 猕猴桃属植物种类繁多，全世界有66个种，约118个种下分类单位(变种、变 型)，其栽培品种也较多，主要是中华猕猴桃和美味猕猴桃。猕猴桃为多年生藤本果 树，生长周期长，用常规方法进行遗传基础研究，效率不高；、由于地理分布的重叠和 种类间的自然杂交，产生了多种中间过渡类型，使其种间和种内品种的界线并不十分 清晰，增加了猕猴桃遗传变异研究的难度。 本文以猕猴桃10个种、34个栽培品种共42个生物型的叶片为试验材料，采用 了逐个优化，建立了猕猴桃基因组RAPD分析的最佳反应体系。即总反应体积20uL， 025mmol·L～，引 Taq酶1．0U、模板DNA80ng、MgCl21．25mmol·L～、dNTPs 物1．0 min：94(2变性lmin，37。C退火1 ng·gL～。PCR热循环参数为94℃预变性5 rain．72℃延伸2min，循环40次：最后在72℃延伸6min。 试验从80个随机引物中筛选出了扩增结果稳定、谱带清晰的引物38个，进行 1 1．0forWindows软件进行聚类分析。 聚类分析结果显示，中华猕猴桃“武植2号”和美味猕猴桃“哑特”在距离系数 为46．0时聚为一类，说明美味猕猴桃和中华猕猴桃亲缘关系较近：美昧猕猴桃品种 “米良1号”、“青城l号”和绝大多数中华猕猴桃品种聚类距离系数为964，所有的 美味猕猴桃和中华猕猴桃品种聚类距离系数为104．5，且聚类的先后秩序有交叉现象。 因此，根据RAPD分析结果，认为将这两个种归为同一个种更为合理；“川猕l号” 和“川猕2号”、“徐香”和“徐冠”、“华美l号”和“华美2号”、“武植2号”和“武 植3号”都分别在较近的距离水平上聚在一起，说明猕猴桃品种之间确有按原产地聚 类的趋势。 一图谱，可将猕猴桃42个生物型中的12个生物型区别开来。 “皖翠”是1993年发现的“海沃德”自然芽变新品种，由安徽农业大学园艺学 院选育。本试验研究发现，“海沃德”与“皖翠”在38个随机引物扩增中，有14个 引物出现了18条特异带，说明“皖翠”在DNA水平上呈现了较大范围的的变异。 bp、 从“海沃德”与“皖翠”的18条特异带中，选择了两条分子量分别为740 649 bp bp的特异带，进行了分离、纯化、克隆与测序，根据测序结果设计出4条20 的特异引物，再进行SCAR—PCR扩增。 SCAR-PCR扩增结果，分子量为649 bp的特异带在“皖翠”与“海沃德”中都 扩增出了条带，说明“皖翠”这一RAPD扩增特异带并不存在：“皖翠”扩增出现了 分子量为740bp的特异带，而“海沃德”未出现此带，证明“海沃德”与“皖翠”存 在此变异位点，成功地将“皖翠”变异的RAPD标记转化为SCAR标记。 关键词：猕猴桃，种质资源，RAPD分析，SCAR标记 n Abstract Thereareabundant resourcesin Actinidiainthe 66 germplasm genus and118 taxononicunits．ThevarietiesinA．chinensisandAdeliciosa species intraspecies were cultivatedinkiwifruit a vinefruitthe extensively production．Asperennial growth ofkiwifrUitisso thatthe isnotefficien