罗氏乳杆菌jc1无细胞上清培养液降胆固醇能力的研究.pdfVIP

摘 要 罗氏乳杆菌JC-I 无细胞上清培养液降胆固醇能力的研究 学科、专业：工科、食品科学 入学时间：2008 年 9 月 1 日 硕士研究生姓名：于瑞莉 答辩时间：2011 年 3 月 6 日 指导教师：郭本恒 教授 授予学位时间： 摘 要 高热量食物的摄入和不合理的膳食结构致使动脉硬化、高血压、静脉血栓等心脑血 管疾病的发病率逐年上升，严重影响着人类的健康。而血清胆固醇含量过高则是引起这 一系列疾病的重要原因之一。但是其作用机理还处于假说阶段，尚未定论。本论文从体 外模型角度继续探索乳酸菌移除胆固醇的作用机理。 罗氏乳杆菌普遍存在于人类和大部分动物的肠道中，是目前已报道的具有降胆固醇 能力的乳酸菌之一，具有耐酸、耐胆盐和肠道定殖特性，具有研究价值。本文研究发现 罗氏乳杆菌 JC-I 在无细胞参与的情况下仍表现出胆固醇移除能力，其无细胞上清培养液 （Cell free supernatant, CFS ）的胆固醇移除率可达到68.57%，且移除率随 CFS 浓度的降 低而降低。沉淀圈现象表明 JC-I 的CFS 中含有胆盐水解酶（Bile Salt Hydrolyase ，BSH ）。 CFS 通过加热处理和调pH 使 BSH 失活或由BSH 作用的共沉淀现象不能发生的情况下， 观察 CFS 是否还表现出胆固醇移除能力，其中 BSH 活力通过 HPLC 测得。实验结果表 明，经过热处理的CFS 胆固醇移除率和 BSH 活性大幅度降低；CFS 的pH 值为 7.0 时， 由BSH 引起的共沉淀作用不能发生，但是 CFS 仍具有胆固醇移除能力。因此推断，CFS 中含有除BSH 以外的可移除胆固醇的有效成分。 CFS 分别经过乙醇提取、乙酸乙酯萃取、70%硫酸铵处理后，经过盐析获得的蛋白 沉淀有较高的移除胆固醇能力。又经 TCA 处理除去蛋白和 SDS 使蛋白变性以后，CFS 基本丧失移除能力。CFS 经多种蛋白酶消化处理后，CFS 也失去胆固醇移除能力，进一 步说明此有效成分为蛋白质类。 本文对此有效蛋白进行了分离纯化，在纯化过程中，CFS 通过超滤得到浓缩液，硫 酸铵分级沉淀的饱和度范围为 50%-70%，获得的蛋白沉淀无 BSH 活性，但移除胆固醇 作用的活性纯化倍数可达 5.6 。样品通过DEAE Sepharose F.F 阴离子交换层析进一步分 离纯化。采用 pH 为 7.0、含 0-0.5mol/L NaCl 的磷酸盐缓冲液进行梯度洗脱时，分离效 果较好，得到了电泳纯的目的蛋白，比酶活为61.6U/mg，纯化倍数为 11.7。经 SDS 分析，其分子量约为 60kDa 。 关键词：罗氏乳杆菌 JC-I ，CFS，降胆固醇，分离纯化 I Abstract Study on the Cholesterol Reducing Activity in a Cell-Free Supernatant of Lactobacillus reuterin JC-I Subject: Engineering Specialty: Food Science Time of enrollment: 09.01, 2008 Master graduate student: Ruili Yu Time of oral defense: 03.06, 2011 Faculty adviser: Benheng Guo, Pro Time of conferring degree: