茶树SSR分子记技术体系的建立与应用.pdfVIP

茶树SSR分子标记技术体系的建立与应用 摘 要 久、分布广泛，种质资源极为丰富，但与其他重要经济作物相比，目前对茶树遗传 基础的研究相对缺乏，在此方面的知识积累相对薄弱，．尤其是对SSR标记技术的应 用更是鲜见报道。本研究利用现有生物数据库中的茶树EST资源，开发SSR引物， 并建立SSR标记技术体系，然后应用于茶树品种资源的遗传多样性分析。其主要结 果如下： 采用改进的DNA提取方法提取高质量的茶树基因组DNA，用已知浓度的 LambdaDNA DNA浓度的方法。该法在国内发表的文献中还未见采用。 通过对茶树SSR反应体系各因素进行优化，建立最适的反应条件为：反应总体 1．5-2．5mmol／L，dNTPs0．2 积20此，各成分的浓度或含量分别为lxBuffer，MgCl2 mmoi／L、引物各O．25 DNA聚合酶0．75U，DNA模板用量30ng。PCR lunol／L、Taq min，35 rain；95℃1rain，各引物最佳温度退火45S，72℃1 扩增程序为95℃5 个循环；72℃10rain。经多次扩增实践证明，该技术体系的重复性和稳定性良好。 利用公共数据库(NcBI)中的茶树EST序列，采用Primer3软件设计了33对 组DNA进行扩增，有37对引物获得了扩增产物，其可扩增率为74％。用37对可扩 增引物对43个茶树品种(系)扩增，经8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，其中 有34对引物产生多态性，不同引物扩增带数分布在l～11条之间，扩增片段大小介 于150～350 bp。 从34对可扩增引物中选择16对扩增43个茶树品种(系)，首次采用毛细管电 泳检测其扩增产物，共获得142个等位变异。应用DPS软件，进行遗传距离和相似 问的遗传变异十分宽广。根据UPGIVIA法构建聚类树状图，在平均遗传距离水平上， 可将43份材料划分为7个类群，大部分具有相近系谱的品种(系)被聚在一起。 可见，SSR分子标记技术能较好地揭示品种资源间的亲缘关系。 利用非变性聚丙烯酰胺凝胶银染技术和毛细管电泳检测方法对供试茶树品种 (系)不同引物的扩增产物进行检测，初步建立了43个供试材料在34个SSR位点 的指纹，为构建我国茶树种质的SSR基因型数据库奠定了方法学基础。 本论文研究的开展，将加速茶树EST资源的开发利用与SSR标记技术在茶树遗 传研究领域的应用，对茶树饱和遗传图谱构建、起源演化研究与系统分类、品种与 种质鉴别、特定性状的分子标记辅助选择育种等方面都具有一定的应用价值与推动 意义。 关键词：茶树；SSR；分子标记；种质资源；遗传多样性 Ⅱ inTeaPlant ofSSRMolecularMarkerMethod TheEstablishment andIts sinensis皿．)o．KuntzelApplication 【Camellia Abstract Teaart economicwitha cultivationand、砘de is important crop verylong history range resourceoftea was distribution．The veryabundant．However,thegenetic genetic plant re